spantide对急性坏死性胰腺炎胰腺肠源性感染治疗作用的研究

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1、Spantide对急性坏死性胰腺炎胰腺肠源性感染治疗作用的研究【摘要】研究P物质受体拮抗剂Spantide能否减少肠道细菌移位的发生、减轻胰腺肠源性感染并提高实验动物的生存率。方法:将健康成年SD大鼠随机分为对照组（24只）和实验组（再分为NS、P物质和Spantide3组，每组34只）。除实验组分别各取10只作48h死亡率观察外，余均于制模成功后8h和16h处死。取末端回肠行病理组织学评分；用放免γ计数器测定尿液中99m锝亚锡喷替酸（99mTcDTPA）的脉冲数，计算肠黏膜通透性；取胰腺和末端回肠内容物作细菌培养。结果:Spantide组与NS组及P物质组比较，肠黏膜病理学改变明显减轻

2、，胰腺细菌培养阳性率也明显降低（P0.05）。Spantide组48h死亡率明显低于其它两组（P0.05）。结论:使用P物质受体拮抗剂Spantide可明显减轻急性坏死性胰腺炎时胰腺肠源性感染的程度，提高实验大鼠的生存率。【关键词】急性坏死性胰腺炎神经激肽1受体P物质肠系膜淋巴结大鼠SpragueDaa公司；浓缩型兔抗大鼠P物质抗血清、即用型SABC试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；亚锡喷替酸（DTPA）购自中国原子能科学研究院同位素所；锝（99mTC）购自中国核动力研究设计院第一研究所。1.2实验方法及步骤1.2.1实验分组将126只大鼠随机分为对照组24只、ANP实验组102只

3、。ANP实验组又分为生理盐水（NS）组、P物质组、Spantide组，每组34只。1.2.2模型制作大鼠用3%戊巴比妥钠（按体质量每100g0.1ml）腹腔注射麻醉后妥善固定，取上腹正中切口，切开腹壁进入腹腔。将十二指肠提出切口，向胰管以恒定速度（0.1ml·min-1）注入5%牛磺胆酸钠（按体质量每100g0.1ml），并于近端空肠内缓慢注入100μCi99mTcDTPA（同位素99mTc标记的大分子物质亚锡喷替酸)。ANP制模后10min，各组大鼠尾静脉相应地缓慢注射NS、0.0025%P物质及Spantide0.5ml。关腹后向大鼠背部皮下注入NS46ml。将其放入代谢笼，留取8h

4、和16h尿液。ANP各组分别取10只大鼠用于48h死亡率和生存时间观察，其余ANP各组大鼠分别于8h和16h处死采取标本。对照组仅将十二指肠提出切口，轻轻翻动胰腺3次，然后回纳腹腔，关腹，而不注射牛磺胆酸钠。1.2.3肠黏膜通透性的检测99mTcDTPA在体内不代谢，可通过尿液测定其含量。尿液中同位素脉冲数可以间接反映肠黏膜通透性[67],即：肠黏膜通透性(%)=99mTcDTPA排泄率(%)=[（尿液测定值-本底测定值）×总尿量/（药物测定值-本底测定值）]×100。1.2.4标本采取称取8h和16h大鼠尿液，用放射免疫γ计数器测定尿中99mTcDTPA脉冲数。取部分胰腺和回肠内

5、容物分别做需氧菌和厌氧菌培养。切取部分末段回肠组织，留作光镜和电镜检查。1.2.5肠壁的病理学检查取末端回肠组织于10%福尔马林溶液及4%戊二醛中固定，分别进行光镜和电镜观察。用单盲法对胰腺和肠黏膜组织进行病理学评分[89]。1.2.6各ANP组动物48h死亡率和平均生存时间观察各ANP组分别取10只大鼠，自模型制作成功至动物死亡为止，计算各ANP组大鼠的死亡率和平均生存时间。1.3统计学处理用SPSS软件对数据进行统计学分析，计量资料采用t检验，各组数据以x-±s表示；计数资料采用四格表确切概率计算法。P0.05被认为两组间有显著差异。2结果2.1末端回肠的病理学检查肉眼观察：NS组和

6、P物质组大鼠腹腔内可见较多血性腹水，肠系膜、大网膜出现皂化斑，胰腺可见充血水肿、出血坏死灶及皂化斑，病变以胰头、体部为重，结肠及小肠管壁充血水肿，小肠色泽暗红，肠蠕动明显减少，弹力减弱，部分大鼠肠管内可见血性内容物；Spantide组大鼠腹腔内可见少量淡黄色腹水，肠系膜、大网膜可见少量皂化斑，胰腺可见轻度充血水肿及皂化斑，肠管壁轻度水肿，形态学改变较前减轻；对照组大鼠腹腔内无腹水，胰腺和肠管未见明显异常改变。光镜观察：对照组肠黏膜无异常，NS组和P物质组大鼠在制模后8h肠黏膜即出现水肿，黏膜上皮变性、坏死、脱落，局部肠黏膜表面被覆假膜，黏膜及黏膜下层可见血管扩张、出血及炎症细胞浸润，16h

7、后以上病理变化加重；Spantide组大鼠肠黏膜轻度水肿，黏膜及黏膜下层血管扩张充血及炎症细胞浸润减轻。电镜下观察：NS组和P物质组大鼠在制模后16h肠微绒毛坏死、脱落，线粒体肿胀，细胞紧密连接破坏，Spantide组以上病理变化减轻。单盲法病理学评分结果见表1。表1各组肠黏膜组织病理学评分1）与对照组比较，P0.01；2）与Spantide组比较，P0.05　　2.2肠黏膜通透性的改变见表2。表2各组大鼠肠黏膜通透性的