visfatin对大鼠肝脏胆固醇代谢及srebp2的调控作用

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1、visfatin对大鼠肝脏胆固醇代谢及SREBP2的调控作用【摘要】目的:探讨visfatin对血浆胆固醇代谢和肝胆固醇合成的影响.方法:将空载体转染对照组(NC组),大鼠visfatin基因真核表达质粒转染普通饲料组(NT组)和高脂组(HT)大鼠,并测定转染前后各组大鼠血浆胆固醇及肝脏HMGCoA还原酶和固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)mRNA表达的变化.结果:visfatin质粒注射3d后,NT和HT组大鼠血浆胆固醇均较注射前明显下降〔(1.61±0.18)vs(1.25±0.09)mmol/L和(2.37±0.11)vs(1.74±0.12)mmol/L,均P0.05

2、〕;高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)也明显降低〔(0.83±0.09)vs(0.56±0.09)mmol/L和(1.32±0.09)vs(0.91±0.04)mmol/L,P0.05〕;NT和HT组大鼠SREBP2mRNA表达均明显高于NC组〔(0.37±0.06),(0.36±0.07)vs(0.21±0.04),均P0.05〕,NT组HMGCoA还原酶mRNA水平明显高于NC,HT组〔(0.89±0.13)vs(0.37±0.07)和(0.55±0.16),均P<0.05〕,NC组与HT组无明显差异.结论:visfatin可能通过促进SREBP2和HMGCoA还原酶表达来调节体

3、内胆固醇代谢.【关键词】内脂素胆固醇HMGCoA还原酶固醇调节元件结合蛋白2  0引言  visfatin又称前B细胞克隆增强因子(PBEF),是最近发现的一种脂肪细胞因子,也称为内脂素.研究表明,visfatin具有类胰岛素作用,能够促进脂肪的合成与聚集〔1-2〕.目前的研究大多集中在visfatin与2型糖尿病、胰岛素抵抗、肥胖的关系,但其与胆固醇代谢的关系目前并不清楚.固醇调节元件结合蛋白(SREBP2)与羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCoA还原酶)是主要的胆固醇生物合成通路的调控元件,与胆固醇代谢密切相关.因此,我们通过构建大鼠visfatin基因重组真核表达质粒并

4、导入大鼠体内,探讨visfatin过表达对肝SREBP2与HMGCoA还原酶表达的影响,从而分析其对胆固醇代谢的调节作用.  1材料和方法  1.1材料去内毒素质粒大量提取试剂盒(Omega公司);Trizol(Invitrogen公司);反转录酶MMLV,TaqDNA聚合酶(TaKaRa公司);羊抗鼠visfatin多克隆抗体(SantaCruz公司);HRP标记的兔抗羊二抗(中杉金桥公司);化学发光试剂盒(康成生物公司);DYYIII稳压稳流电泳仪、双垂直板蛋白电泳槽(北京六一仪器厂);半干转印迹电转系统,BIORADGradientCyclerPCR仪(Biorad

5、);日立7020型全自动生化分析仪;SD雄性大鼠15只(第三军医大学大坪医院实验动物中心).  1.2方法  1.2.1pcDNA3.1visfatin重组真核表达质粒的构建本课题组前期构建,经DNA测序鉴定,导入基因无突变,构建成功.  1.2.2动物分组及处理将大鼠15只随机分为正常饮食pcDNA3.1(+)空质粒注射组(NC组,n=5)、正常饮食pcDNA3.1visfatin重组真核表达质粒注射组(NT组,n=5)和高脂饮食pcDNA3.1visfatin重组真核表达质粒注射组(HT组,n=5).各组大鼠喂养16g/kg.于注射前后72h各取其空腹血,分离血浆,于第2

6、次取血后处死大鼠取肝脏组织.  1.2.3HMGCoA还原酶和SREBP2表达测定用常规方法提取大鼠肝组织总RNA,用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)半定量测定肝HMGCoA还原酶和SREBP2mRNA,以βactin为内参.HMGCoA还原酶上游引物为:5'CCTGCGTGTCCCTGGTCCTA3';下游引物:5'CTTTGGGTTACTGGGTTTGG3'.SREBP2上游引物:5'GGCTCTGGCCGCAATGTA3';下游引物:5'TGACCGAGGAGCGTGAGT3'.βactin上游引物:5'CCACTGCCGCATCCTCTTCCTC

7、3';下游引物:5'TCCTGCTTGCTGATCCACATCT3'.  1.2.4其他指标测定采用WesternBlot法测定血浆visfatin水平;血浆总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)在全自动生化分析仪进行测定.  统计学处理:各项数据资料以x±s表示,组内比较采用配对t检验,组间比较用方差分析,多组间两两比较用StudentNeanKeuls检验,数据处理采用SAS8.0软件.  2结果  2.1血

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