uplcms测定人血清中霉酚酸浓度的研究

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1、UPLCMS测定人血清中霉酚酸浓度的研究作者：胡岚岚，汤建林，周世文，刘智远，刘明，徐颖【摘要】　　目的建立一种快速、准确测定人血清中霉酚酸浓度的超高效液相色谱质谱（UPLCMS）测定方法。方法在血清中加入内标吲哚美辛，采用超高效液相色谱联合质谱的方法对血清中的霉酚酸进行分离测定。结果霉酚酸在0.05～100.00μg/mL的浓度范围内呈良好线性，r=0.9980，最低检测线为0.05μg/mL，方法回收率大于91.2%，日内、日间变异系数均小于5%。结论该方法准确、快速、灵敏，可用于霉酚酸的治疗药物监测

2、、人体内药代动力学及生物等效性研究。【关键词】霉酚酸；超高效液相色谱质谱；血清Abstract:ObjectiveToestablisharapidandaccuratemethodusingUPLCMSforquantificationofmycophenolicacidinhumanserum.MethodsIndometacinanserumsampleandmycophenolicacidinhumanseruminedbyUPLCMS.ResultsThecalibrationcurveongt

3、heconcentrationrangeof0.05～100.00μg/mLandthelimitofthequantitativedetectionL.Therecoveryofthemethodethod,thisassaycanbeusedinthesupervisionofmycophenolicaciddrugandthestudyofpharmacokiicsandbioavailability.　　Keyycophenolicacid;UPLCMS;serum马替麦考酚酯(mycophenola

4、temofetil)是霉酚酸(MPA)的2吗啉代乙酯，在体内脱脂化后形成具有免疫抑制活性的代谢物MPA，MPA选择性作用于T、B淋巴细胞，抑制其增殖。临床上用于预防急性器官排异反应，治疗同种异体肾移植后难治性排异反应。霉酚酸的血药浓度测定方法国内外已有报道[17]，但以高效液相色谱分离、荧光检测居多，且多数样品处理过程繁琐，分析时间长。本文在参考　　2结果　　2.1分离特性在选定的色谱条件和质谱条件下，分别考察了7个不同来源的空白血清、空白血清加对照品、对照品及实测样品的色谱分离情况。测得霉酚酸质谱图（图1

5、）。由图可见，被测物与内标物两者峰形良好，分离完全，无杂质峰干扰，血样中霉酚酸和吲哚美辛的保留时间分别为1.97min和3.30min。另外采用高效液相色谱紫外检测法（HPLCUV）测定血清霉酚酸浓度，并与UPLCMS法比较，结果见图2。HPLCUV测定空白血清有干扰，待测物和内标物未分离。而UPLCMS检测空白血清干扰小，待测物和内标物分离完全，分离特异性好。　　2.2标准曲线和线性范围取空白血清480μl加入不同浓度系列标准溶液20μl，配制成霉酚酸血清浓度分别为100.00、80.00、60.00

6、、40.00、20.00、10.00、5.00、1.00、0.50、0.10、0.05μg/mL的霉酚酸血样各两份，按上述血清样品处理方法操作，每一浓度进样2μl。记录质谱图，以浓度为横坐标，以霉酚酸与内标峰面积比为纵坐标进行线性回归，得回归方程：y1＝0.715569x+0.151809（r=0.997908，leve1=6，n=2，各点RSD<15%），线性范围为0.05～10.00μg/mL；y2＝0.34927x+4.79164（r=0.990555，leve1=6，n=2，各点RSD<15

7、%)，线性范围为10.00～100.00μg/mL，血浆中霉酚酸定量下线为0.05μg/mL（S/N=10，=0.05±0.001，RSD=3%，n＝5）。　　2.3回收率试验配制0.1、1.0、10.0、40.0、80.0μg/mL霉酚酸血样各6份，按照上述血清样品处理方法操作，进样分析，计算低、中、高各种浓度的霉酚酸的方法回收率（n=6）分别为109.8%、117.8%、91.2%、114.2%和98.0%；变异系数分别为6.9%、6.3%、1.5%、3.9%和4.3%。结果表明，低、中、高各种浓度的回收率

8、均符合要求，方法准确可靠。　　2.4精密度试验配制0.1、1.0、10.0、40.0、80.0μg/mL霉酚酸血样各5份，按照血清样品处理方法操作，在1d内不同时间处理测定，考察日内精密度；连续4d于同一时间配制0.1、1.0、10.0、40.0、80.0μg/mL等5种浓度的霉酚酸血样各5份，处理测定，考察日间精密度。计算得低、中、高各种浓度的日内变异系数（n=5）分别为1.5%、2