川芎嗪对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤保护作用及抗细胞凋亡作用论文

川芎嗪对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤保护作用及抗细胞凋亡作用论文

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1、川芎嗪对大鼠肾脏缺血/再灌注损伤保护作用及抗细胞凋亡作用论文王汉民,谭华,赵洪雯,张鹏,黄朝晖,何丽洁,陈光磊,吴雄飞【摘要】目的:探讨川芎嗪对缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠肾功能、肾脏组织形态学、细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法:将大鼠随机分为假手术(S)组、I/R组、再灌注后给予川芎嗪(TMPpost)组、再灌注前给予川芎嗪(TMPpre)组.freelmol/L,P<0.01)],[(196±55)vs(295±64)μmol/L,P<0.01)],[(372±46)vs(563±6

2、2),P<0.01)];肾小管上皮细胞损伤及超微结构改变明显减轻,肾组织凋亡细胞数明显减少[(13.6±2.9)vs(28.8±4.6),P0.01)];Bcl2蛋白表达明显增强[(1.15±0.12)vs(0.88±0.12),P0.05)],Bax表达明显减弱[(0.87±0.11)vs(1.15±0.09),P0.05)].结论:川芎嗪可明显减轻I/R肾损伤,其保护作用机制与Bcl2蛋白表达增强和Bax蛋白表达减弱介导的肾脏细胞凋亡有关.【关键词】川芎嗪;肾脏;再灌注损伤;细胞凋亡;保

3、护【Abstract】AIM:ToexploreLigustrazine(Tetramethylpyrazine,TMP)ontheeffectofinratsorphology,cellapoptosisandexpressionsofrelatedgenesinratslydividedinto4groups,operation(n=10),I/Rmodel(n=10),TMPpost(n=10,intraperitonealTMP32mg/kgper6hafterreperfusionf

4、or30min)andTMPpre(n=10,intraperitonealTMP32mg/kgat45min,8,16,24hbeforeischemia)groups.Bloodureanitrogenandcreatinineicalmethod.RenalcellapoptoticindexinedbymeansofterminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabeling(TUNEL).Theexpressions

5、ofBcl2andBaxinkidneymunohistochemicallyevaluatedandquantifiedby100SX型透射电镜(日本JEOL公司),凝胶图像分析系统(美国Kodak公司)等.1.2方法1.2.1分组及动物模型制备将40只大鼠随机分为4组,每组10只.S组:假手术对照组;I/R组:缺血再灌注模型组;TMPpost组:在I/R模型的基础上,再灌注30min后腹腔注射川芎嗪,32mg/kg,每6h1次,共4次;TMPpre组:在制备I/R模型前24,16,8

6、h,45min腹腔注射川芎嗪,32mg/kg,I/R造模后不再注射川芎嗪.I/R模型制作参照Basile等方法进行[3],用30g/L戊巴比妥钠30~50mg/kg腹腔注射麻醉,经腹正中切口暴露双侧肾脏,游离肾蒂,用无损伤动脉夹同时钳夹双侧肾动脉,阻断45min后松开动脉夹.假手术组仅游离双侧肾脏,暴露60min后再关闭腹腔切口.24h后再用戊巴比妥钠麻醉大鼠,采血并摘取左肾,血标本以4000r/min离心10min,分离血清,置-20℃保存用于测定BUN和Cr.取部分肾组织分别用40g/L甲醛

7、和30mL/L戊二醛固定以制备石蜡切片和电镜切片,另取部分肾组织迅速置入液氮中,然后于-80℃冰箱保存,用于提取蛋白.1.2.2肾功能测定测定血BUN采用二乙酰一肟显色法,测定血Cr采用碱性苦味酸比色法,应用721分光光度计测定.1.2.3肾组织学观察石蜡切片行HE和PAS染色,光镜下观察肾组织形态学改变,参照Paller等方法进行评分[4],每只大鼠肾组织随机选择10个视野(×200),每个视野下随机选择10处肾小管,共按100个肾小管计分,分数越高表示肾小管损伤程度越严重.电镜切片行醋酸铀和

8、枸橼酸铅染色,在透射电镜下观察肾组织的超微结构变化.1.2.4肾组织细胞凋亡检测采用TUNEL检测细胞凋亡指数,参照TUNEL试剂盒说明书进行,显色采用DAB试剂盒进行.光镜观察凋亡细胞,胞核中有棕黄色颗粒者为阳性细胞.于阳性表达分布区域、光镜200倍下随机选择5个无重叠视野,计数阳性细胞,以凋亡阳性细胞数占总细胞数的百分比作为细胞凋亡指数(AI).1.2.5肾组织Bcl2,Bax免疫组化染色采用兔抗鼠Bcl2和BaxmAb,参照抗Bcl2和Bax试剂盒进行,显色采用DAB试剂盒进行.光镜

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