辛伐他汀对大鼠股骨骨折愈合的影响论文

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1、辛伐他汀对大鼠股骨骨折愈合的影响论文梁春雨,张柳,赵文国,程爱国,王丽娜【关键词】辛伐【关键词】大鼠;骨密度;骨组织形态计量学;骨折愈合;他汀类药物0引言他汀类药物是目前临床用于降低胆固醇、预防心血管疾病的常用药物,其作用机制是抑制羟甲基戊二酰辅酶A还原酶,从而降低肝脏胆固醇的合成.Mundy等[1]的研究第一次表明,他汀类药物具有激活成骨细胞、促进骨合成代谢作用.freelg/kg腹腔注射麻醉,麻醉成功后,将大鼠仰卧于手术台上,常规去毛、备皮、碘伏消毒,于右大腿中段外侧取纵形皮肤切口,长约2cm,沿股外侧肌间隙钝性分离进入达

2、股骨干,固定股骨,在骨干中1/3段用线锯锯断成横行骨折,此过程中注意保护坐骨神经和肌肉组织,然后,以直径约1.5mm的克氏针逆行穿入骨折近端且从后侧股骨大粗隆穿出,复位骨折后再将其顺行穿入骨折远段髓腔,生理盐水冲洗,逐层关闭伤口.然后,将动物随机分成两组(每组10只):给药组(Fracture+Simvastatin)以5mg/kg隔日灌胃给辛伐他汀药物一次;对照组(Fracture+Vehicle)以同样方法给与等量的生理盐水.所有的受试大鼠在术后6、电压:40KV、电流:3.2mAs),观察大鼠股骨骨折骨痂的连续性和测量骨

3、痂最大直径.1.2.2密度测定应用NorlandXR36双能X线骨密度测量仪(DEXA,美国),采用小物体扫描模式,准确度0.01%,扫描速度60mm/s,分辨率(resolution)1.0mm×1.0mm,扫描宽度5.0cm的参数值,进行右侧股骨中1/3段(骨痂)骨密度的测量.测量时,将固定骨折部位的克氏针拔除,其范围包含了以每个骨折部位为中心的无克氏针矩形区域,即:感性趣区.为了评价精确度,随机选取一例,在位置不变的情况下,连续测量BMD各5次,精确度用变异系数CV表示(CV=5%).1.2.3形态学染色将骨折骨痂标本,

4、置入40g/L多聚甲醛和0.6mol/L戊二醛混合缓冲固定液中(pH=7.2~7.4),在4℃条件下固定24~48h,再经0.3mol/LEDTA2Na缓冲液(pH=7.4,4℃)脱钙,隔5~7h更换脱钙液,经过3~5连续切片,HE染色,透明后中性树胶封片,Olympus显微镜下作普通光镜观察.1.2.4骨组织形态计量学测定将骨痂标本固定后逐级脱水,浸入3∶7的甲基丙烯酸甲酯中24h[真空负压651.88mmHg(1mmHg=0.133kPa),1次],然后以半聚合甲基丙烯酸甲酯包埋制成实验标本.采用JungK硬组织切片机,每

5、个标本连续切6张10μm和4张5μm厚的不脱钙骨切片,其中5μm薄片采用甲苯胺蓝染色用于普通光学显微镜下观察和测量,10μm厚片用于荧光显微镜下观察测量.统计学处理:实验数据建立EXCEL数据库,资料用SPSS11.0来处理,采用成组t检验.数据用x±s表示,以P<0.05表示具有统计学意义.2结果2.1CR摄片观察观察大鼠离体右侧股骨干CR片发现,对照组和给药组大鼠骨折端均有连续性骨痂包绕,骨折线模糊或消失,骨痂量没有明显的差别,未发现内固定克氏针松动现象,但是,给药组有3只股骨干的骨折骨痂塑形明显好于对照组;测量所得两组骨

6、痂最大直径宽度,对照组:(4.35±0.48)mm,给药组:(4.43±0.39)mm,经统计学分析差异无显著性(P>0.05).2.2骨密度测量骨痂骨密度测量结果(g/cm2)显示,对照组:0.1208±0.0101,给药组:0.1292±0.0075,经统计学分析差异有显著性(P<0.05).2.3组织学观察给药组与对照组比较骨痂中均主要以骨性骨痂为主,软骨骨痂少见或基本消失,小梁骨成熟度较高,成骨细胞功能活跃,破骨细胞少见,不典型,骨小梁粗细均匀一致,间距无明显增宽,二者比较无明显的组织形态学差异.2.4骨组织形态计量学

7、测量对照组及给药组的BV/TV(%),Tb.Th(μm),Tb.N(#/mm),Tb.Sp(μm)分别是31±5,40±6;157±48,136±38;3.0±0.4,3.8±0.5;351±25,314±25.其中,两组Tb.Th经统计学分析差异无显著性(P>0.05),BV/TV,Tb.N,Tb.Sp经统计学分析差异有显著性(P<0.05).3讨论他汀类药物是临床上广泛应用的一种降血脂药物,然而,Mundy等[1]通过动物实验,在对3万多种天然或人工化合物的筛选中,意外发现它还是所选药物中唯一具有激活成骨细胞、促进骨合成代

8、谢作用的药物.该实验将他汀类药物加入小鼠(2T3)和人(MG63)成骨细胞培养液中,经印迹杂交方法分析显示,BMP2mRNA的表达水平明显提高,而且BMP2的表达成特异性,但它并没有增加BMP4、IL6、甲状腺素及相关多肽的表达.在经2.5μL辛伐他汀处理的人MG63成骨细胞

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