颈椎间盘蛋白多糖聚合体的分布及其意义

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1、颈椎间盘蛋白多糖聚合体的分布及其意义首席医学网2007年12月06日16:51:24Thursday作者：陈伯华作者单位：青岛大学医学院附属医院骨科，山东青岛266003【摘要】目的探讨颈椎间盘蛋白多糖聚合体的分布及其意义。方法本研究利用本室自行制备的透明质酸特异性荧光探针，运用探针杂交技术，观察蛋白多糖聚合体在胎儿、正常成年人病理颈椎间盘中不同的形态学分布。结果蛋白多糖聚合体多分布在细胞表面胶原纤维间等特殊部位，其分布随年龄增加而逐渐减少。结论蛋白多糖聚合体的合成随年龄的增加而减少，推测其可能为颈椎间盘退变的病因之一。【关键词

2、】蛋白多糖聚合体颈椎椎间盘DISTRIBUTIONOFTHEPROTEOGLYCANAGGREGATEINHUMANCERVICALINTERVERTEBRALDISCSANDITSSIGNIFICANCESCHENBOHUA,ZHENGHONGJUN,LZHENHUA,etal(DepartmentofOrthopaedics,TheAffiliatedHospitalofQingdaoUniversityMedicalCollege,Qingdao266003,China)［ABSTRACT］ObjectiveTo

3、studythedistributionofproteoglycanaggregateinhumancervicalintervertebraldiscsanditsclinicalsignificance.MethodsThecervicalintervertebraldiscsoffetal,normaladult,andadultwithdiskherniawereobservedviaafluorscentprobetostudythemorphologicdistributionofproteoglycanaggr

4、egate.ResultsProteoglycanaggregatesweremostlyfoundonthecellularsurfacesandbetweenthecollagefibersinbothanulusandnucleusregions.Thedistributiongraduallydecreasedfollowingthegrowingoftheage.ConclusionThesynthesisofproteoglycanaggregatedecreasesfollowingthegrowingofthea

5、ge,whichisspeculatedthatmaybeoneofthecausesofcataplasiaofintervertibraldisc.［KEYWORDS］proteoglycanaggregate;cervicalvertebra;intervertebraldisc颈椎间盘退变所致颈椎疾患系颈肩痛的常见疾患之一。有关腰椎间盘退变的基础研究较多［1～3］，而有关颈椎间盘的基础研究则不多。为此，本研究采用透明质酸荧光探针方法，对颈椎间盘细胞外间质蛋白多糖含量进行了分析。现报告如下。1材料与方法1.1样本来源1

6、.1.1胎儿椎间盘正常流产胎儿1例，胎龄为33周。死后5第5页共5页h内切取其C3,4～T1,2完整椎间盘，于清洁尼龙袋内贮存在液氮（-170℃）中备用。1.1.2正常成年人椎间盘颈椎外伤后手术的病人2例，男女各1例，年龄分别为54、38岁。外伤后24h内手术，分别取出C4,5、C5,6椎间盘。贮存方法同胎儿椎间盘。1.1.3病理椎间盘颈椎椎间盘突出症病人3例，男2例，女1例；年龄34～56岁。手术取出C4，5椎间盘2例，C5，6椎间盘2例。取出的椎间盘30min内液氮速冻，贮存方法同胎儿椎间盘。1.2椎间盘组织冷冻切片的制备将

7、冻存的椎间盘样本于使用前1d切成5μm厚的切片。胎儿与正常人椎间盘分成纤维环、髓核两部分切片，病理椎间盘每例为1张切片。切片后快速固定液固定，贮存于-20℃的冰箱中备用。1.3蛋白多糖聚合体荧光探针的制备1.3.1取材生后2d的小牛1只，颈动脉切开插管放血致死，死后1h内取双侧肩胛软骨，剪成约0.5cm×0.5cm大小碎片，于无菌小玻璃瓶内贮存在液氮中备用。1.3.2蛋白多糖的提取将牛的肩胛软骨碎片与2倍体积的含蛋白酶抑制剂的4.0mol/L盐酸胍缓冲液（pH5.9）置于0℃下充分粉碎混匀，4℃下振荡90h，然后以13000r/

8、min离心45min，上清液在4℃下对水透析24h，换液，13000r/min离心透析30min，取上清液真空冻干，-20℃贮存。依据HASCALL等［2］的方法，氯化铯密度梯度分离提取蛋白多糖单体、透明质酸和连接蛋白。真空冻干后密闭-20℃贮存。1.3.3荧光