2 o2 处理大块牛松质骨后成分分析论文

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1、2O2处理大块牛松质骨后成分分析论文.freelinoacidanalysis;-ponent，heterologousAbstract:AIMToanalysetheponentsofantigen-elimi-natedmassivebovinecancellousbone（MBCB）andtostudythemechanismofhighconH2O2eliminatingtheantigenici-tyofxenogenicbone.METHODSDry-ethodeasuretheorganic，mineral，andass

2、ivefleshbovinecancellousboneblocksLL-1conH2O2for0，24，48，72，96h.Thequan-titiesofhydroxyprolineandprolineinthefivegroupseasuredbyaminoacidanalysis.RESULTSAftertheanti-geneliminatingprogram，MBCBoccurredasetreatedinhighconH2O2inthefivegroups，butnodiffer-encesbetedecreas-ing

3、tendencyinoacidsoftheboneblocksinthefivegroups;differenceinoacidsaycontainreasonablerateoforganicandminer-almaterial，echanicprop-ertyofMBCBafteritsantigen-eliminatingprogram.Denatu-ralizationofproteinintheconditionofoxidationofhighcon-H2O2ajormechanismtoeliminatetheanti

4、-genicityofmassivexenogenicbone.0引言在以往颗粒型异种松质骨处理与应用的基础上［1］，为了更广泛地应用大块异种骨修复四肢大节段骨缺损，我们对高浓度H2O2去抗原处理异种骨的机制进行研究，同时对异种骨经去抗原处理后的成分进行分析，为异种骨块的临床应用提供实验基础.1材料和方法1.1材料新鲜牛肱骨上端松质骨.1.2方法大块去抗原牛松质骨（antigen-extractedmassivebovinecancellousbone，MBCB）选取新鲜牛肱骨上端松质骨，截取15mm×20mm×30mm形状规则长方体

5、骨块，用50℃压力水反复冲洗，沥干;50℃下1∶1氯仿甲醇脱脂24h;50℃下300mLL-1H2O2浸泡24h;重复步骤2次，脱脂共24h×3，H2O2处理24h×3;双蒸水透析12h×2;0.3molL-1的HCl内脱钙处理5min，双蒸水反复冲洗至pH6.0;冷冻干燥，密封包装.1.2.1MBCB的扫描电镜SEM观察4mm大小的电镜样品分别取材于新鲜牛松质骨及MBCB，多聚甲醛固定，锇酸及乙晴处理，真空镀膜，扫描电镜观察.1.2.2MBCB的成分检测参照《中华人民共和国药典》1995版，干燥失重法及残渣法.检测步骤:取相同小坩锅

6、4个，置80℃烘烤24h，蒸发坩锅内水分;选取密封的MBCB冻干骨4块，编号A，B，C，D，分别准确称质量（m），再分别放入坩锅内称质量（m1）;将MBCB及坩锅同置于110℃烘烤24h，干燥塔内凉至室温后称质量（m2）;将块型牛松质骨载体及坩锅再置于马佛电阻炉内，800℃灼炽7h，干燥塔内凉至室温后准确称质量（m3）;计算方法∶含水量m1-m2，含有机质morganic=m2-m3，含无机质mmineral=m3-（m1-m）.1.2.3MBCB的氨基酸分析将25块新鲜牛肱骨松质骨块经水洗、脱脂后分为5组，各组5枚骨块，分别置于50

7、℃300mLL-1H2O2溶液中0，24，48，72和96h进行浸泡处理，将处理后的异种骨块进行氨基酸检测分析.将上述各组样品均置于80℃下烘干24h，在干燥室内冷却至室温后准确称取20mg，放于消化管中;加入6molL-1HCl共3mL，立即旋紧管盖，置110℃下酸水解22h;将酸水解液倒入蝶型坩锅内，于100℃水浴挥发盐酸，再加入少量蒸溜水，蒸干共3次;用适量pH2.2柠檬酸钠缓冲液溶解，使其终浓度为干骨样品20gL-1;12589g离心15min，取上清液备用，做羟脯氨酸、脯氨酸及氨基酸总量定量分析.羟脯氨酸、脯氨酸测定:Bec

8、kman121MB型氨基酸分析仪，分析程序为自编胶原特异性氨基酸分析程序［2］;填充树脂为BeckmanAA10型，柱床10cm，pH2.20，配制pH3.0柠檬酸钠缓冲液和茚三酮试剂［3］，600μmolL-1羟脯氨酸