欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:25511446
大小:57.00 KB
页数:8页
时间:2018-11-20
《fmoc固相合成法合成黑色素细胞刺激素(msh)的工艺研究论文》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、Fmoc固相合成法合成黑色素细胞刺激素(MSH)的工艺研究论文【关键词】固相合成;肽类;MSH;芴甲氧羰基【Abstract】AIM:Tostudytheprocessandinfluencingfactorsofsynthesizingthemelanocytestimulatinghormone(MSH)peptidebyFmocsolidphasesynthesis.METHODS:SH,anditsfitforthelargescaleproduction.【Keyoc【摘要】目的:研究9芴甲氧羰基(Fmoc)固相合
2、成法合成黑色素细胞刺激素(MSH)工艺的步骤及其影响因素.方法:采用Fmoc保护α氨基,以TBTU/HOBT/DIEA为缩合剂合成MSH.用色谱仪和质谱仪对合成的多肽进行纯化、鉴定.结果:多肽合成的得率可达63%,经反相高效液相色谱仪(RPHPLC)对合成的多肽进行纯化后可得纯度为98.67%的目标肽.通过基质辅助激光解吸附电离飞行质谱仪(MALDIMS)检测所合成多肽的分子质量为1663.88ku,与其理论分子质量1664.08ku相符.结论:该合成法具有快捷、简便、高效地合成多肽MSH的特点,适合大批量生产.【关键词】固
3、相合成;肽类;MSH;芴甲氧羰基0引言多肽作为生物体内的重要组成部分之一,在体内各脏器中有许多复杂而特殊的生理活性[1].黑色素细胞刺激素(MSH)是由13个氨基酸组成的一种内源性的神经免疫调节肽,可抑制发热与主要类型的实验性炎症.固相法作为多肽合成领域的一个重大突破在合成多肽MSH中具有快速、简便、高效等优点[2].freeloc)基团保护α氨基以合成MSH.1材料和方法1.1材料RPHPLC型高效液相色谱仪(Beckman公司);基质辅助激光解吸附电离飞行质谱仪(MALDIMS,Heoc保护的氨基酸(Merck公司);1
4、羟基苯并三氮唑(HOBT),1氧3双二甲胺羰基苯骈三氮唑四氟化硼盐(TBTU,ABI公司);二异丙基乙胺(DIEA),三氟乙酸(TFA,Sigma公司);乙腈(Fisher公司);NN二甲基甲酰胺(DMF),二氯甲烷(DCM),异丙醇,FmocRinkAmideMBHAResin[吉尔生化(上海)有限公司].1.2方法1.2.1树脂的选择根据导入反应基团的不同,可以把树脂分为氯甲基树脂、羧基树脂、氨基树脂或烯肼型树脂等[4].本次Fmoc固相合成的MSH的末端需要酰氨化,故需要选用一种Rink氨基树脂即RinkAmideMB
5、HAResin,在RinkAmideMBHAResin中加入缩合剂TBTU/HOBT/DIEA使MSH的Val与树脂之间形成酰胺键,以此来完成氨基酸的固定.1.2.2FmocValOH与FmocRinkAmideMBHAResin的连接根据合成多肽的序列,将RinkAmideMBHAResin置于已用DCM浸泡过的反应器中,加入DMF浸泡30min左右,使其充分膨胀,然后用含200mL/L哌啶的DMF溶液脱除树脂上的Fmoc基团,再用异丙醇洗涤树脂2次,最后用DMF洗涤树脂3次,当用50g/L茚三酮检测呈阳性时将FmocVa
6、lOH,TBTU,HOBT,DIEA及DMF配成的反应液加入到树脂中,室温下反应1.5h,当用茚三酮检验呈阴性时再用异丙醇、DMF溶液各洗涤2次.即完成第1个氨基酸与树脂的连接.1.2.3接肽反应选用的接肽反应缩合剂为具有缩合效率高、反应速度快、不易发生消旋化反应的TBTU/HOBT/DIEA的混合液[5],反应时间约为1.5h,每次反应后取少量树脂用茚三酮法检测,若呈阳性说明反应不完全,继续加入缩合剂,使其充分反应.若呈阴性说明反应完全,用含200mL/L哌啶的DMF溶液脱除新接入氨基酸的Fmoc基团以便于下一个氨基酸的羧
7、基反应.重复此过程至MSH中所有氨基酸全部接入.1.2.4MSH-树脂的切割MSH合成完毕后,用N2吹干MSH树脂,将其置于反应器中,加入切割试剂(10mLTFA,0.5mL苯甲硫醚,0.25mL巯基乙醇,0.5mL水,0.75g苯酚),室温下磁力搅拌反应3h左右,使MSH与树脂分离,再经砂芯过滤,将滤液加入冰乙醚中析出多肽,最后经离心分离获得MSH粗品.1.2.5MSH的纯化和质谱鉴定多肽合成过程中的各种副反应、消旋化以及脱保护的过程中由于保护基的残留、肽键的断裂、烷基化等原因会造成产品不纯.根据目的肽的要求可采用适当的方
8、法进行纯化.我们选用的是具有快速、高效和较高回收率等特点的RPHPLC进行纯化[6],采用MALDIMS鉴定所得产品.2结果2.1а氨基保护基团的选择及其脱除绘制Fmoc基团的脱除效果与哌啶的含量及其脱除时间关系曲线,可以看出随着哌啶含量的增加,脱除反应速度在加快,本次合成选用含200mL
此文档下载收益归作者所有