hplc法测定广东土牛膝中腺苷的含量论文

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1、HPLC法测定广东土牛膝中腺苷的含量论文卢绮雯，李坚，萧鹏，谢艳婷【摘要】目的测定广东土牛膝中腺苷的含量。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱：DiamonsilTMC18柱，流动相：甲醇磷酸盐缓冲溶液（体积比12∶88），流速：1.0mL·min-1，检测波长260nm.freelinethecontentofadenosineinRadixEupalorriChinenseLinnbyRPHPLC.MethodsSamplesonsilTMC18column（250mm×4.6mm，5μm）usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO

2、4(12∶88)asmobilephase.ThefloL·min-1andthedetection.ResultsThemethodexhibitedgoodlinearityfrom0.0396to0.6336μg.TheaveragerecoveryforadenosineethodcouldbeusedtodetermineadenosinecontentinRadixEupalorriChinenseLinn.KeyL，称定重量，超声处理45min，放冷，再称定重量，用50%（体积分数）甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。2.1

3、.2对照品溶液精密称取腺苷对照品9.90mg，置50mL量瓶中，加50%（体积分数）的甲醇适量，振摇使溶解，再加50%（体积分数）的甲醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为198μg·mL-1的腺苷对照品贮备液。2.2色谱条件及系统用性试验色谱柱：DiamonsilTM(钻石)C18柱（250mm×4.6mm，5μm，迪马公司）；流动相：甲醇磷酸盐缓冲溶液［取0.01mol·L-1磷酸二氢钠68.5mL与0.01mol·L-1磷酸氢二纳31.5mL混合（pH＝6.5）］（体积比12∶88）；流速：1.0mL·min-1，检测波长：260nm；柱温：30℃

4、。分别取对照品溶液（腺苷浓度为7.92μg·mL-1），供试品溶液20μL注入色谱仪，按上述色谱条件，记录色谱图（图1,2）。腺苷和样品中相邻色谱峰的分离度大于1.5；理论塔板数以腺苷峰计算不低于3000；保留时间约为17.40min。图1腺苷对照品HPLC图略图2广东土牛膝药材样品HPLC图略2.3方法学考察2.3.1线性与范围分别精密吸取一定量的对照品贮备液用50%（体积分数）的甲醇稀释成浓度为1.98、3.96、7.92、15.84、23.76、31.68μg·mL-1的对照品溶液，分别取20μL进样测定，以峰面积（A）对对照品质量浓度（ρ

5、）进行回归，得回归方程A=32416.91ρ+1071.34，r=0.9999，试验表明腺苷在0.0396～0.6336μg之间与峰面积线性关系良好。2.3.2精密度试验取质量浓度为7.92μg·mL-1的腺苷对照品溶液20μL，连续测定5次，记录峰面积并计算，结果腺苷峰面积的平均值为256682，RSD为0.72%，表明仪器精密度良好。2.3.3稳定性试验取土牛膝供试品溶液（批号20051102），在0、2、4、8、12ｈ分别进样20μL，记录峰面积，结果腺苷峰面积的平均值为229720，RSD为1.69%，表明供试品溶液在12h内稳定。2.3

6、.4重复性试验取同一批号（批号20051102）样品6份，按“2.1.1”项下方法制备溶液，分别进样测定，结果腺苷平均含量为0.1406mg·g-1，RSD为1.15%，表明分析方法精密度良好。2.3.5加样回收试验精密称取已知含量（批号20051102）土牛膝样品约0.5g，共9份，分别用刻度吸量管精密加入浓度为198μg·mL-1的腺苷对照品溶液0.23、0.23、0.23、0.36、0.36、0.36、0.50、0.50、0.50mL，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样20μL进行分析，结果见表1。表1腺苷回收率试

7、验结果略2.4样品测定取土牛膝样品3批，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，分别取7.92μg·mL-1的对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，计算腺苷的含量，结果见表2。表2样品的测定结果（略）3讨论3.1提取溶剂的选择分别用不同体积分数（30%、50%、70%、90%）甲醇混合液进行试验，结果腺苷的含量分别为0.1398、0.1408、0.1383、0.1267μg·mL-1，表明用体积分数为50%的甲醇溶剂提取比较完全。3.2腺苷提取方法选择文献［4-7］主要用超声处理和加热回流方法,本文考察了以50%（体积分数）甲醇

8、为提取溶剂，样品分别超声处理和回流处理，结果腺苷的含量分别为0.1408、0.1385μg·mL-1,并且超声处理45min与60min