反相高效液相色谱法测定附子中乌头碱等3种成分的含量论文

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1、反相高效液相色谱法测定附子中乌头碱等3种成分的含量论文邓雅琼，刘荣华，邵峰，卢锋【摘要】目的测定附子中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含量。方法采用反相高效液相色谱（PR-HPLC）法，使用UltimateTMXB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相为乙腈-0.2%冰醋酸（浓氨水调节pH值为7.29）；检测波长：230nm；流速1.0ml·min-1；柱温为35℃。结果乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的回归方程分别为：Y=31.258X+5.794，r=0.9999；Y=17.418X+5.2369，r=0.9998；Y=1

2、8.989X+6.1866，r=0.9997。三者的线性范围分别为：3.3125～106μg/ml；0.7357～23.5419μg/ml；1.9661～62.9164μg/ml。结论该方法简便、准确、分离效果好、灵敏度高,可用于附子的质量控制。【关键词】附子反相高效液相色谱乌头碱新乌头碱次乌头碱Abstract：ObjectiveTodevelopahighperformanceliquidchromatography(HPLC)methodforthedeterminationofthreeprincipalalkaloids

3、inaconiteroot.Methods（4.6mm×250mm,5μm）columnbyisocraticelutionusingAcetonitrile-0.2%Glacialaceticacid（adjustedtopH7.29monia）.ResultsTheaveragerecoveryofthethreealkaloidsultaneouslyateTMXB-C18ratesobtainedesaconitinel,0.7357～23.5419μg/ml,1.9661～62.9164μg/ml(r=0.9999,r=

4、0.9998,r=0.9997).ConclusionThecontentsofalkaloidsinaconiterootvariedsignificantlyfromspecies;hencequalitycontrolofaconiterootisverynecessary.KeycarmichaeliDebx.的子根加工品［1］。附子性大热.freelstation工作站；Sartorius分析天平，KQ-250VDB型双频数控超声清洗器。1.2试剂乌头碱(110720-200410)、新乌头碱(110799-200404

5、)、次乌头碱(110798-200404)对照品购自中国药品生物制品检定所，水为双蒸水(实验室自制)，乙腈(HPLC级，Tedia，美国)，甲醇(HPLC级，Tedia，美国)，附子药材为四川布拖GAP种植基地购买（由江西中医学院生药组褚小兰老师鉴定），其他试剂为分析纯。2方法2.1混合对照品溶液的配制分别精密称取乌头碱、新乌头碱、次乌头碱对照品1.59，1.13，1.51mg，置于10ml容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度线，摇匀，即得对照品储备液。2.2供试品溶液的配制取不同产地的黑附片适量，粉碎，过筛。分别取黑附片粉末5g，精

6、密称定，置具塞锥形瓶中，加10%氨水5ml，湿润0.5h，再加入乙醚50ml，超声提取10min，密塞，放置过夜，过滤，再以5ml乙醚分3次洗涤药渣，过滤，合并滤液，室温挥干，乙腈溶解残渣，用0.45μm微孔滤膜过滤，定容至2ml，摇匀，作为样品溶液。2.3色谱条件UltimateTMXB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：乙腈-0.2%冰醋酸（氨水调pH为7.29），过0.45μm滤膜；检测波长：230nm；流速：1.0ml·min-1；柱温35℃。2.4测定方法在选定的色谱条件下，分别吸取混合对照品溶液和供试

7、品溶液10μl，注入高效液色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，按外标法计算各生物碱的含量。3结果3.1方法的专属性精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液、空白溶液10μl，在选定的色谱条件下进样分析，乌头碱、次乌头碱、新乌头碱峰形良好，基线平稳。本方法能准确测定乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的浓度，灵敏度较高，见图1。图1高效液相色谱图（略）3.2HPLC方法学评价3.2.1线性关系考察分别精密称取“2.1”项下混合对照品储备液10，20，100，200，400，1000μl置1ml容量瓶中，加乙腈定容至刻度线，摇匀，分别进样10μl，按上述

8、色谱条件进行HPLC分析，以峰面积Y对样品浓度(μg/ml)进行回归处理，得到乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的回归方程分别为：Y=31.258X+5.794，r=0.9999；Y=17.418X+5.2369，r=0.9998；Y=18.989X+6.