红茶菌调节小鼠免疫功能的实验研究

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1、红茶菌调节小鼠免疫功能的实验研究作者：李波清，孟玮，王志强，于敏，孙旭红【关键词】红茶菌;,,小鼠;,,免疫功能　　摘要：目的探讨红茶菌对小鼠免疫功能的调节作用。方法Balb/c小鼠30只，体重18～22g，随机分为两组，用红茶菌液给小鼠灌胃30d后处死，以MTT法测定NK细胞的杀伤活性；以腹腔巨噬细胞吞噬白色念珠菌的方法评价巨噬细胞吞噬功能；以胸腺细胞增殖法和脾细胞增殖法分别测定IL1和IL2的生物活性。结果红茶菌能显著提高NK细胞的杀伤活性；巨噬细胞吞噬功能明显增强；红茶菌灌胃组IL1和IL2活性分别为：0.549±0.024，0.405±0.018；对照组分别为：0.341±

2、0.021，0.361±0.011，实验组与对照组比较，IL1，IL2活性得到显著提高(P＜0.01)。结论红茶菌能显著增强小鼠的免疫功能。　　关键词：红茶菌;小鼠;免疫功能　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheregulativeeffectofblackteafungusontheimmunologicalfunctionofmice.MethodsThirtyBalb/cmice(lydividedintoticeinistrationforthirtydays.ThekillingactivityofNKcellsethod,andperi

3、tonealmacrophagesousethymocyteorspleniccellproliferationtest.ResultsTheactivitiesofIL-1andIL-2ofmiceentalgrouprespectively;theyentalgroupthanthoseincontrolgroup(P＜0.01).ThekillingactivityofNKcellandthephagocytesfunctionofthemacrophagesinvitroarkedlypromoted(P＜0.01).ConclusionTheblackteafungusc

4、anenhancetheimmunologicalfunctionofmicesignificantly.　　Keymunologicalfunction　　红茶菌又称“海宝”或“胃宝”，是在我国民间广为流行的一种保健饮品，为我国传统医药的重要组成部分。前期研究中我们发现红茶菌对小鼠具有显著的抑瘤作用，为进一步探讨其抑瘤机制，我们通过用红茶菌对小鼠进行胃内灌注的方法，观察红茶菌对小鼠免疫功能的调节作用。　　1材料与方法　　1.1动物Balb/c小鼠，体重18～22g，雌雄兼有，引自北京大学基础医学部实验动物研究中心。　　1.2细胞株K562细胞由北京大学基础医学部免疫系提供。　　1

5、.3试剂红茶菌，本室保存菌种，总菌数为5.5×107CFU/ml，RPMI1640（Gibco公司），LPS（Sigma公司），白色念珠菌（本室保存），ConA（北京医药站），MTT（Sigma公司），DMSO（国产）。　　1.4仪器全自动酶标仪（MultiskanMS），CO2培养箱（Forma公司），低速冷冻离心机（IEC公司），电子精密天平（METTLERTOLEDO）。　　1.5动物分组随机把Balb/c小鼠分为对照组和实验组，各组15只。对照组以自来水0.5ml/只，实验组以红茶菌0.5ml/只，每天胃内灌注1次，第30天颈椎脱臼处死小鼠，进行实验观测。　　1.6MTT法

6、测定NK细胞杀伤活性常规取脾脏制成细胞悬液，用不含血清RPMI1640液洗涤2次，以10%BCSRPMI1640配成1×106个细胞/ml，作为效应细胞；取连续传代培养的K562细胞悬液各100μl加入96孔平底培养板，再向每孔中加入MTT（5mg/ml）10μl，每组设3个平行孔，另设3个效应细胞对照孔（100μl上述脾细胞加100μl10%BCSRPMI1640及10μlMTT）和靶细胞对照孔（100μl上述K562细胞加100μl10%BCSRPMI1640及10μlMTT），置37℃，5%CO2培养箱中4h，取出后1000r/min，离心10min，测560nm处A值，计算

7、NK细胞杀伤活性。NK细胞杀伤活性（%）=实验孔A值效应细胞对照孔A值靶细胞对照孔A值×100　　1.7体外巨噬细胞吞噬功能测定各组小鼠于实验第30d分别腹腔内注射冷RPMI1640液5ml，轻柔按摩10s后吸出液体，1000r/min离心10min，弃去大部分上清，留约5ml，加100μl白色念珠菌液（1×105CFU）混匀，置37℃恒温培养箱内60min后混匀涂片，瑞氏染色，计算体外巨噬细胞吞噬百分率［1］。　　1.8IL1和IL2的诱生与检测　　1.8.1IL1