去脂软肝方对高脂诱导大鼠脂肪肝血管性血友病因子作用的实验研究

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1、去脂软肝方对高脂诱导大鼠脂肪肝血管性血友病因子作用的实验研究去脂软肝方对高脂诱导大鼠脂肪肝血管性血友病因子作用的实验研究［摘要］目的探讨去脂软肝方对高脂诱导脂肪肝大鼠肝组织血管性血友病因子的影响作用。方法高脂饮食复制人鼠脂肪肝模型,将实验鼠随机分为三组：正常组，模型组，去脂软肝方组。去脂软肝方组予去脂软肝方药液灌冒(1mL/200g)共12周；HE染色观察肝脏脂肪变性情况；测定大鼠血清血脂、肝脂、血浆血小板聚集率及肝组织血管性血友病因子(vWF)o结果12周末模型组大鼠血脂［血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)］

2、水平比正常组高，差异有统计学意义(P<0.05)；模型组大鼠肝组织匀浆(肝脏TC、TG)与比正常组高，差异有统计学意义(P<0.05)；去脂软肝方组血清脂质和肝组织脂质水平比模型组低，羌异有统计学意义(P<0.05)；模型组大鼠血小板聚集率比正常组高，羌异有高度统计学意义(P<0.01)；模型组大鼠肝脏组织中vWF比正常组高，差异有高度统计学意义(P<0.01)；去脂软肝方组血浆血小板聚集率变化及肝组织vWF比模型组低，羌异有高度统计学意义(P<0.01)o结论去脂软肝方能明显改善高脂诱导脂肪肝大鼠血脂、肝脂及肝组

3、织脂肪变性。减少vWF分泌、抑制血小板聚集、减轻血管及肝窦内皮细胞损伤可能是其作用机制之一。［关键词］去脂软肝方;高脂;脂肪肝;大鼠；血管性血友病因子［中图分类号］R575.2［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2014)01(a)-0004-03近年来，随着社会的发展，生活水平提高，我国患脂肪肝人群数量逐年递增，部分脂肪肝如果迁延不愈，可进展为肝纤维化甚至肝硬化［1］。因此，如何在早期阻止脂肪肝的进一步发展是目前研究的关键。课题组前期对云南省荣誉名中医、著名中西医结合肝病专家苏涟教授以“辨病为主，从瘀

4、而治”思路拟定的“去脂软肝方”进行研究,证实该方具有较好的改善高脂诱导脂肪肝血脂、肝脂肝及肝组织脂肪变性作用［2-6］o但其作用机制及关键环节尚不完全清楚。本研究采用高脂诱导非酒精性脂肪肝大鼠，观察脂肪肝大鼠模型与血瘀证、血管性血友病因子（vonWil1ebrandfactor,vWF）及肝窦内皮细胞（liversinusoidalendothelialcell,LSEC）关系，探讨去脂软肝方治疗脂肪肝的作用机制。1材料与方法1.1实验动物雄性SD大鼠30只，体重（100±10）g,清洁级。购自四川省医学科学院实验

5、动物研究所，许可证号：SCXK（川）2010-16,云南中医学院（以下简称“我院”）动物房饲养，造模及观察。1.2药品及主要试剂去脂软肝方三七1g＞山楂15g、菊花10g＞白术15g、青皮6.莪术15g等七味中药）购自我院门诊部药房，由我院中药制剂室制成流浸膏（含生药1.44g/mL）；胆固醇（Cholesterol）分析纯,购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司；猪油，购自昆明沃尔玛超市，生产日期：20110326；大鼠vWFELISA检测试剂盒（美国R&D公司），批号20110401A：购自昆明晨绿生物科技开发有

6、限公司。1.3造模方法将大鼠分为正常组10只，高脂饮食造模组20只，正常组大鼠每天予以标准大鼠饲料喂养，造模组大鼠每天予以高脂饲料（88%普通饲料基础上加10%猪油，2%胆固醇）喂养，连续12周，均自由饮水。1.4分组及给药自造模之日起，高脂饮食造模组20只，随机分为模型组10只和去脂软肝方组10只；止常组和模型组给予生理盐水灌胃（1mL/200g,每日），去脂软肝方组按去脂软肝方药液灌胃（1mL/200g,每日），连续12周。1.5观察指标①1IE染色光镜下观察肝组织病理学变化；②血脂［血清总胆固醇（TC）、三酰

7、甘油（TG）］、肝脂检测（肝脏TC、TG）；③血浆血小板聚集率检测、肝组织vWF检测（酶联免疫吸附法）。1.6统计学方法采用SPSS17.0软件包进行统计学处理，计量资料以均值土标准差（x±s）表示，组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验，以P<0・05为差异有统计学意义。2结果2.1肝组织HE染色HE染色显示正常组大鼠肝组织结构清晰、完整，肝小叶形态结构正常，肝细胞大小均匀，胞圆形，呈条索状排列，可见中央静脉。模型组大鼠肝细胞明显肿大，呈黄色，切面油腻，中央静脉周围脂肪病变明显，体积较正常明显增加，可见

8、超过2/3的肝细胞胞浆中出现大小不一的圆形脂滴空泡，有的空泡融合将细胞核挤向胞膜下，可见肝细胞肿大，胞浆疏松呈网状、半透明（胞浆疏松化），严重者胞浆儿乎完全透明（气球样变）；去脂软肝方组可见一定量的肝细胞胞浆中出现大小不一的圆形脂滴空泡。2.2去脂软肝方对高脂饲料致脂肪肝模型大鼠血清脂质和肝组织脂质变化的影响模型组大鼠血脂（血清TC、TG）与比正常组高，差异