热盛胃出血小鼠模型的制作及墨旱莲对其止血作用机制的研究

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1、热盛胃出血小鼠模型的制作及墨旱莲对其止血作用机制的研究庄晓燕杨菁李华侃于冬梅王建【摘要】目的：制作热盛胃出血小鼠模型，探讨墨旱莲对其止血的机制。方法：以等量的附子、干姜、肉桂、党参、黄芪、辣椒水煎剂(1g/ml)给小鼠灌服，每日1次连服10d后，尽食16h，给模型组腹腔注射消炎痛并灌服乙醇，制成热盛胃出血模型;并对其中3组灌以不同剂量的墨旱莲水煎剂。1.5h后摘眼球取血，测量血小板聚集率等。解剖小鼠取胃观察并记录胃黏膜出血点。结果：热盛胃出血小鼠模型制作成功。其胃黏膜出血点较空白对照组明显增多(P0.01)，血小板积聚率也明显下降。

2、而不同浓度的墨旱莲水煎剂对热盛胃出血小鼠模型均有明显止血作用，其胃黏膜出血点较模型对照组明显减少(P0.01);血小板积聚率也明显升高(P0.05或P0.01)，且呈计量依赖性。结论：热盛胃出血小鼠模型制作成功，该模型适宜进行临床热盛胃出血疾病的研究;不同剂量的墨旱莲水煎剂对热盛胃出血小鼠模型均有明显止血作用，提示墨旱莲水煎剂在临床可以用来治疗热盛胃出血疾病。【关键词】胃出血;模型;墨旱莲;止血;临床意义墨旱莲又称鳢肠、旱莲草、野菊花等，始载于《唐本草》，《本草纲目》云：鳢，乌鱼也，其肠也乌，此草柔茎，断之有墨汁出，故名，俗称墨菜是

3、也。细茎颇如莲房状，故得莲名[1]。墨旱莲是菊科植物鳢肠(EcliptaprostrateL)的干燥地上部分。其味酸、甘，性凉;入肝、肾、胃经，又能入血分;具有滋补肝肾、凉血、止血的功能。墨旱莲最早应用于出血性疾病的治疗，以墨旱莲为君药配伍其他药物，或用单味墨旱莲用于血症，治疗鼻衄、咳血、吐血、便血、产后出血、外伤出血及药物引起的溶血等作用显著，有“止血神药”之称[2]。而对于墨旱莲止血机理的研究目前国内外还仅仅限于凝血时间、出血时间和收缩血管方面进行测定，尚缺少深入的研究，除本课题组外还没有采用动物模型进行研究的报道。故本实验根据

4、中医理论，结合近代研究，制作热盛胃出血小鼠模型，通过给予不同浓度的墨旱莲水煎剂对热盛胃出血小鼠模型治疗，观察并测定相关指标，研究墨旱莲止血的机理。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1实验动物昆明种小鼠雌雄各半，体重30～50g;由辽宁医学院实验动物中心提供。　　1.1.2实验药品与试剂　　墨旱莲、附子、肉桂、干姜、党参、黄芪，购自锦州市成大方圆药店;消炎痛，山西临汾云鹏药业有限公司，批号：20030507;其余均为国产分析纯试剂。　　墨旱莲水煎剂的制备：称适量墨旱莲，用蒸馏水漂洗3次，烘箱干燥后用粉碎机粉碎，过100目筛;用

5、蒸馏水浸泡30min三层纱布过滤4次，置电热套中煎煮，所得煎出液，加热至沸腾，再用文火煮1h，所得煎出液，混合后减压浓缩至1g/ml。　　热盛胃出血模型药的制备：将等量的附子、干姜、肉桂、党参、黄芪、辣椒用蒸馏水浸泡30min，加热至沸腾，再用文火煮1h，三层纱布过滤3次所得煎出液，混合后减压浓缩至1g/ml。　　消炎痛注射液的制备：将消炎痛片碾碎，溶于蒸馏水中，过滤至澄清后，浓缩至7.5mg/ml。　　血小板积聚率相关试剂的配制：磷酸盐缓冲液的配制称取氯化钾2g、磷酸二氢钾2g、氯化钠80g、磷酸氢二钠8.8g、加蒸馏水1000m

6、l，调节pH值至7.4;EDTA缓冲掖的配制0.07mol/LEDTA3ml加磷酸盐缓冲液5ml，再加蒸馏水12ml;EDTA甲醛缓冲液的配制0.07mol/LEDTA3ml加4%甲醛溶掖5ml，再加磷酸盐缓冲液2ml，加蒸馏水12ml，调节pH值至7.4。　　血小板稀释液的配制：将0.16mol/L尿素、1.7mmol/L枸橼酸钠、40%甲醛各0.1ml加蒸馏水至100ml，过滤后4℃保存。　　1.3主要仪器　　旋转蒸发器(R201BⅡ)，上海申顺生物科技有限公司;连续变倍体式镜(XST18型)，上海蒲光显微仪器有限公司;普

7、通光学显微镜(4XBE型)，上海长方光学仪器有限公司;调节电热套(DZTg/g鼠重、10mg/g鼠重、20mg/g鼠重。各组动物均饲以普通饲料，其中Ⅱ～Ⅴ组小鼠每日灌服热盛胃出血模型药5g/kg鼠重1次;Ⅰ组小鼠灌以等量生理盐水;连续给药10日后，尽食16h;Ⅱ～Ⅴ组小鼠腹腔注射7.5mg.ml消炎痛的蒸馏水溶液0.01ml/g鼠重，Ⅰ组小鼠灌以等量生理盐水;30min后，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组小鼠以墨旱莲水煎剂灌胃，用量分别为5mg/g鼠重;10mg/g鼠重;20mg/g鼠重;Ⅰ组、Ⅱ组小鼠灌以等量生理盐水;3h后重复灌胃1次。第2次灌胃2

8、h后，Ⅱ～Ⅴ组小鼠再灌服50%乙醇0.01ml/g鼠重，Ⅰ组小鼠灌以等量生理盐水。1.5h后取材检测。　　2.2指标检测　　2.2.1胃黏膜出血点计数断颈处死小鼠取胃，结扎幽门，从食管注入10%甲醛溶液2ml，结扎贲门后，将胃浸入10