地塞米松诱导体外培养星型胶质细胞凋亡机制的研究论文

《地塞米松诱导体外培养星型胶质细胞凋亡机制的研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、地塞米松诱导体外培养星型胶质细胞凋亡机制的研究论文金红艳欧阳铭戴冀斌【关键词】地塞米松；星型胶质细胞；凋亡；P53；Bax；Bcl2摘要：目的：探讨地塞米松引起体外纯化培养的大鼠大脑皮质星型胶质细胞凋亡的机制。方法：不同浓度的地塞米松（浓度为10-5、10-4、10-3mol/L）与纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞共同孵育24小时后，用免疫细胞化学方法检测P53、Bax及Bcl2在星型胶质细胞内的表达情况，表达的强弱用平均光密度表示。结果：P53和Bax的表达随着地塞米松浓度的升高而增强，与对照组比较，各组均有极显著

2、性差异（P0.01）,Bcl2的表达随着地塞米松浓度的升高先是增强而后减弱，与其他组比较10-3组有显著性差异（P0.05）。结论：P53和Bax的表达增强可能是大剂量地塞米松引起星型胶质细胞凋亡的主要因素。关键词：地塞米松；星型胶质细胞；凋亡；P53；Bax；Bcl2在哺乳动物的中枢神经系统内约有一千亿个神经元，而在这些神经元的周围又约有十倍以上的胶质细胞存在，其中以星型胶质细胞数量最多。传统观点认为.freelm3大小，用0.125%胰蛋白酶37℃消化数分钟，过滤（200目），离心（1000rpm5min），去上清

3、，加入DMEM/F12完全培养基（其中含5%胎牛血清，10%小牛血清，L谷氨酰胺2mmol/L，青霉素100u/ml,链霉素0.1mg/ml）制成细胞悬液。计数后按5×104/cm2接种于培养瓶，加入DMEM/F12完全培养基，在37℃、5%CO2培养箱中培养9天（每3天更换培养液一次），第9天将培养瓶置于恒温旋转摇床上(240rpm)，摇18小时，去掉含有悬浮细胞的培养液，用DHanks液清洗3次，进行传代培养即得纯化的星形胶质细胞［2］。经免疫细胞化学方法检测，95%以上的细胞GFAP免疫反应为阳性。122实验分组

4、在24孔培养板的每一孔内放入一张1cm2消毒过的玻片，涂上多聚赖氨酸，然后将星型胶质细胞分组种在玻片上（细胞爬片）。纯化的星形胶质细胞被分成1个对照组和3个实验组，每组3个样本。对照组不加地塞米松，其它3组分别加入终浓度为10-5、10-4、10-3mol/L的地塞米松。在37℃、5%CO2条件下，继续培养24小时,然后作免疫细胞化学分析。123免疫细胞化学染色将各组细胞爬片进行SABC法免疫细胞化学染色。每一培养孔中的细胞爬片经固定、封闭非特异性抗原和消除内源性过氧化物酶等处理后，首先加入特异性抗体（P53、Bax、

5、Bcl2），4℃孵育72h。然后依次加入生物素化羊抗兔IgG，37℃、1h；SABC复合物，37℃、1h；DAB显色5min。每步间均用PBS充分洗涤。所有爬片经脱水、透明、中性树胶封片后，光镜下观察、摄片。以正常兔血清和PBS缓冲液替代一抗作对照染色，结果为阴性。124图像分析用HPIAS1000高清晰图像分析系统进行阳性细胞计数及平均光密度分析。所得数据应用SPSS统计软件，以方差分析进行统计分析，P＜0.05定为差异有显著性,数据以均数±标准差（±s）表示。2结果21形态学观测结果P53对照组：可见少数免疫反应阳

6、性细胞，反应产物呈棕黄色，主要见于胞核（图1）。10-5组：免疫反应阳性细胞增多，反应产物呈棕黄色，见于胞核，胞浆淡染（图2）。10-4组：免疫反应阳性细胞明显增多，反应产物呈棕黄色，见于胞核，胞浆也有表达（图3）。10-3组：大多数细胞呈免疫反应阳性，反应产物呈棕褐色，胞核胞浆界限不清（图4）。Bax对照组：细胞大小形态一致，核膜着色呈棕黄色，胞核中央有透亮区，胞浆淡染（图5）。10-5组：免疫反应产物颜色加深，细胞形态变化不大（图6）。10-4组：颜色进一步加深，细胞形态无太大变化（图7）。10-3组：免疫反应产物

7、呈棕褐色，胞浆染色明显加深，少数细胞体积缩小，核浓缩、深染（图8）。Bcl2对照组、10-5组、10-4组这3组细胞大小形态基本一致，细胞着色变化也不大，胞核胞浆均有着色，反应产物呈棕黄色（图9~11）。10-3组：与前3组比较，10-3组细胞染色明显变浅，尤其是胞浆明显淡染（图12）。图1对照组P53的表达(×200)图210-5组P53的表达(×200)22图像分析结果221地塞米松对P53表达的影响不同浓度（对照组、10-5组、10-4组、10-3组）地塞米松与纯化的星型胶质细胞共同孵育24小时后，P53的表达随

8、着地塞米松浓度的升高而逐渐增强，与对照组比较各组均有极显著性差异（P0.01），各浓度组（10-5组、10-4组、10-3组）之间两两比较也有极显著性差异（P0.01），见表1。222地塞米松对Bax表达的影响不同浓度（对照组、10-5组、10-4组、10-3组）的地塞米松与纯化的星型胶质细胞共同孵育24小时后，Bax的表达也随着