环氧合酶-2在非酒精性脂肪肝病中的表达及意义

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1、环氧合酶?2在非酒精性脂肪肝病中的表达及意义【摘要】目的：探讨环氧合酶?2(cyclooxygenase?2，COX?2)在大鼠非酒精性脂肪肝(NonalcoholicFattyLiverDisease，NAFLD)中的表达及意义.方法:建立大鼠NAFLD动物模型，用免疫组化，RT?PCR，PIAS多媒体彩色病理图纹分析系统分析COX?2相对积分光密度值，每组每张切片随机选取5个视野，像素点0.389μｍ，在9.306×104μｍ测量窗下测量并记录COX?2相对积分光密度值.(责任编辑：admin)　　1.2.4肝组织C

2、OX?2mRNA的表达应用RT?PCR技术检测COX?2mRNA在NAFLD中的表达，用TRIZOL试剂盒提取肝组织总RNA，紫外分光光度计测定RNA浓度及纯度.在逆转录酶MMLV的催化下合成cDNA，取5μLcDNA为模板在TaqDNA聚合酶催化下进行PCR扩增.COX?2的mRNA引物由上海生工生物公司设计并合成.COX?2:正链5′?ATGGCTGCAGAGTTGAAAGC?3′，负链5′?CTCTTACAGCTCAGTTGAACGC?3′，特异扩增片段为430bp;GAPDH:正链5′?AGATCCACAACGG

3、ATACATT?3′，负链5′?TCCCTCAAGATTGTCAGCAA?3′，产物为308bp.扩增条件为：94℃预变性2min，94℃变性30s，60℃退火35s，72℃扩增30s，30个循环后72℃8min.PCR产物在15g/L琼脂糖凝胶，0.5×TBE中电泳，利用GD?8000凝胶成像分析系统对扩增产物条带进行吸光度扫描，以目的基因的吸光度与GAPDH的比值表示目的基因的相对表达含量.　　1.2.5RNA表达，而治疗组和模型组均有表达.COX?2mRNAPCR产物的相对表达量4,8RNA/GAPDH的灰度值及其

4、蛋白相对表达量（略）　　2.66?k?PGF1α,TXB2,6?k?PGF1α/TXB2,IL?1和COX的相关性Pearson双变量分析采用Pearson双变量相关分析显示，IL?1和TXB2与肝组织COX?2水平呈正相关(分别为r:0.763,0.821;P:0.042,0.033)，具有显著性意义，PGF1α与COX?2水平呈负相关(r=-0.289;P=0.026).说明COX?2表达与NAFLD中肝脏炎症呈明显正相关.　　3讨论　　NAFLD是以肝细胞脂肪变性和脂质贮积为特征的临床病理综合征,是肝病领域面临的新

5、挑战.6?k?PGF1α具有扩张血管、抑制血小板凝集的作用；而TXB2具有收缩血管、促进血小板凝集的作用.在生理状态下，它们在体内保持相对平衡，共同维持体内正常的内环境稳定.在有些疾病状态下其平衡将被打乱，测定它们的含量有助于了解疾病的机理及严重程度.实验显示，在肝损伤明显的模型组大鼠中，肝组织6?k?PGF1α含量下降而TXB2含量升高，经Celecoxib治疗后，肝损伤程度减轻，同时6?k?PGF1α升高和TXB2减少.实验证明，肝组织COX?2水平与TXB2与呈正相关，与6?k?PGF1α呈负相关，说明COX?2可

6、以通过增加TXB2的合成，降低6?k?PGF1α/TXB2值而促进非酒精性脂肪肝的肝损伤.　　IL?1是最常见的炎症刺激因子之一.在许多细胞系中，IL?1可以使COX?2mRNA,蛋白表达量及其产物前列腺素的合成大大增加.研究发现，其能使COX?2蛋白表达量持续增加的原因是它增强了COX?2mRNA的稳定性［4］.同时IL?1和LPS等因子，能使COX?2mRNA的转录活化、介导白细胞的聚集粘附和浸润，从而导致局部炎症发生、微血管内皮损伤，表现为微循环通透性增加、组织血肿、致微循环障碍发生等［5］.这与本研究IL?1在模

7、型组大鼠肝组织中的含量高于正常组的结果相一致，且随着NAFLD病程的进展，肝组织中IL?1活化逐步增强.此外，我们还发现治疗组大鼠肝组织IL?1含量低于模型组，其机制可能是通过抑制COX?2的活性，减少了前列腺素代谢过程中活性氧的生成.　　COX?2是启动炎症反应的关键酶，正常组织中不表达或弱表达，但在许多炎症因素刺激下表达升高.在酒精性肝病中，COX?2及其合成产物可以通过干扰脂肪、糖类及蛋白质的代谢，加重肝脏的氧应激和促进多种细胞因子的释放等方面产生作用，从而促进酒精性肝病的肝脏炎症、脂肪变化、肝纤维化的形成和发展［

8、6］.实验证明，在早期的NAFLD中，COX?2表达已经升高，并伴有肝组织损伤、AST和ALT升高等变化，提示在NAFLD肝损伤过程中，早期的肝组织化学性炎症改变即可剌激COX?2表达.在治疗组，COX?2表达降低，可能与Celecoxib减轻NAFLD时的氧应激、使活性氧产物减少、降低它们对COX?2的活性和表达有