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1、酸味中药复方对糖尿病大鼠心肌组织晚期糖化终产物形成及其受体基因表达的影响论文.freelechanismofpoundedSourMedicinalHerbs(CSMH)inpreventingandameliorationtype2diabeticmellitus(T2DM)ratschronicplication,byanalyzingtheeffectsofCSMHonthedepositionofadvancedglycationendproducts(AGEs)andgeneexpressionoftheirreceptormyocardialtissueinT2DMrats.
2、MethodsTherats,andfedalmodels.Thentheratslydividedintothreegroups：untreatedgroup(modelgroup),AGtreatedgroupandCSMHtreatedgroup.ThedepositionofAGEsandgeneexpressionofRAGEinthemyocardialtissueofT2DMratsePCRmethod.ResultsThedepositionofAGEsandgeneexpressionoftheirreceptorinmyocardialtissueincontrolg
3、roupyocardialtissueinCSMHtreatedgroupulationanddoyocardialtissueinT2DMrats.Keyellitus；myocardialtissue；AGEs；RAGE；geneexpression；rat糖尿病心肌病是以收缩和舒张功能障碍为特征的特异性心肌病,容易发生充血性心力衰竭1-2,临床尚无特效药物。动物实验证实,晚期糖化终产物(AGEs)在糖尿病心肌病的发生发展过程中扮演着重要角色,.freelRNA表达的调节作用。1材料与方法1.1主要药物、试剂及饲料酸味中药复方,由乌梅、吴茱萸、白芍、山楂、五味子按3︰3︰3︰4︰3的
4、比例组成,长海医院药学部制成浸膏(1g浸膏含2.21g原药材),置于-20℃冰箱保存,用时以蒸馏水稀释成含浸膏0.83g/mL的稀释液。链脲佐菌素(STZ)、AG均为Sigma公司产品。羟脯氨酸检测试剂盒,南京建成生物工程研究所。RealtimePCRMasterMix、DNA100bp均为MarkerTOYOBOBiotech产品。TrizolReagent,Invitrogen产品。cDNA合成试剂盒,Promega产品。PCR试剂盒,Sangon产品。RAGE引物、GAPDH引物,上海生物工程公司合成。高脂高热量饲料购自上海中国科学院实验动物中心(蔗糖6%、猪油15%、胆固醇1%、
5、蛋黄粉13%、基础饲料65%)。1.2主要仪器SCR20BB型高速低温离心机,HITACHI公司产品。BIORADIcycler5荧光定量PCR仪。PTC-200PCR仪,MJResear公司产品。SmartSpec-3000紫外分光光度计,Biorad公司产品。GELMate2000电泳系统,TOYOBOBiotec公司产品。GIS数码凝胶图像处理系统(配软件),上海天能科技有限公司。1.3造模及分组选用6周龄清洁级雄性SD大鼠,体重(180±20)g,动物合格证号：SCXK(沪)2007-0005。随机取25只为正常对照组,给予普通饲料喂养。其余的给予高脂高热量饲料喂养2个月后,筛选
6、葡萄糖耐量实验(OGTT)异常者按剂量40mg/kg一次性腹腔注射1%的STZ柠檬酸缓冲液,正常对照组给以同体积柠檬酸缓冲液腹腔注射。48、72h连续2次空腹血糖(FBG)≥16.7mmol/L为模型建立成功。造模成功的大鼠随机分为模型组、中药组、AG组。各组大鼠灌胃给药,中药组：15g/(kg·d),AG组：0.1g/(kg·d),正常组和模型组给予同体积生理盐水,每日2次。给药8、12周后观察相关指标的变化。1.4标本采集和指标检测大鼠禁食12h后,各组随机取5只,腹主动脉取血,分离血清,葡萄糖氧化酶法测FBG,全自动生化仪测血清果糖胺(FMN),并立即分离心肌组织置入液氮中保存,用
7、于AGEs含量及RAGE基因表达检测。1.5晚期糖化终产物含量测定参照文献4方法,取心肌组织进行匀浆、离心、水洗、消化后,用荧光分光光度计在370/440nm(发射波长/激发波长)处测定消化液荧光强度。以HEPES缓冲液荧光值为1个任意荧光单位(AU),样品荧光强度依此折算。消化液中羟脯氨酸含量用羟脯氨酸试剂盒测定。AGEs含量以每1mg羟脯氨酸所含的荧光强度为1个任意单位。1.6晚期糖化终产物受体基因表达量测定Trizol法抽提出
