nf-κb对肝癌细胞自噬形成影响

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1、NF-κB对肝癌细胞自噬形成影响[摘要]目的研究抑制核转录因子（NF-κB）对肝癌细胞HepG2自噬的作用及影响。方法常规培养HepG2细胞后分为两组：SN50处理组及空白对照组，然后采用MTT比色法检测细胞生长增殖、Westernblot检测细胞内微管相关蛋白LC3-Ⅱ水平以及MDC染色后，采用荧光显微镜对自噬进行定性观察。结果经SN50处理24、48、72h后，细胞增殖抑制率分别为（20.45±3.70）%、（31.94±4.20）%和（36.44±4.60）%（P＜0.05），自噬相关蛋白LC3-

2、Ⅱ水平的表达上调，同时荧光染色也提示肝癌细胞自噬活性增强。结论阻断NF-κB可以在一定时间内显著抑制HepG2细胞的增殖，其机制可能是增强了细胞的自噬作用。[关键词]肝癌细胞HepG2；SN50；自噬；NF-κB；微管相关蛋白LC3[中图分类号]R329[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2012）07（a）-0035-03EffectofNF-κBonautophagyformationofhumanhepatomacellHAOGaopengWANGShimingDONGXiushanR

3、ENNingFANYueLUYudongDepartmentofGeneralSurgery,theAffiliated4FirstClinicalMedicalSchoolofShanxiMedicalUniversity,ShanxiProvince,Taiyuan030001,China[Abstract]ObjectiveToresearchtheeffectofNF-κBonautophagyformationofHumanHepatomaCellHepG2.MethodsThehumanhe

4、patomacellHepG2wasculturedinvitroanddividedintoSN50groupandcontrolgroup,MTTassaywasusedtotestthecellgrowthdynamically.WesternblotanalysiswasperformedtoassesstheexpressionofLC3-Ⅱ.Theautophagywasobservedusingfluorescentmicroscopebymonodansylcadaverin(MDC)s

5、taining.ResultsTheinhibitionratioofHepG2cellswere(20.45±3.70)%,(31.94±4.20)%and(36.44±4.60)%aftertreatmentofSN50for24,48and72h,thedifferencewasstatisticallysignificantthanbefore(P<0.05).TheexpressionofLC3-IIhadupregulationandfluorescentstainingrevealedth

6、eactivityofautophagy.ConclusionBlockingofNF-κBcansignificantlyinhibittheproliferationofHepG2cellsinacertainperiodoftime,andtheeffectmayassociatedwithincreasedcellautophagy.[Keywords]HumanhepatomacellsHepG2;SN50;4Autophagy;NF-κB;Microtubule-associatedprot

7、einLC3迄今的研究显示NF-κB在多种原发肿瘤中高表达，在恶性肿瘤的发生发展过程中起着非常重要的作用[1]。NF-κB通过调节多种基因的转录从而影响肿瘤细胞的增值、凋亡以及肿瘤的发生等过程；而SN50作为NF-κB的特异性抑制剂[2]，已被广泛用于该通路的研究以及以NF-κB为靶点的疾病治疗[3]。笔者基于已有的知识和研究成果，研究肝癌细胞的自噬活性以及通过使用SN50初步探讨了NF-κB信号通路对肝癌细胞自噬活性的影响。1材料与方法1.1材料与试剂HepG2细胞由山西医科大学寄生虫实验室提供，高糖

8、DMEM培养基购自Neuronbc公司，胎牛血清为北京元亨金马生物技术开发有限公司产品，胰蛋白酶和MTT购自美国Solarbio公司，SN50购自美国Sigma公司，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗购自碧云天试剂公司，微管相关蛋白Ⅰ轻链子（LC3）一抗购自BOSTER公司。1.2细胞培养4将HepG2细胞置于37℃、体积分数5%CO2的培养箱中培养，每3天传代1次，细胞贴壁达到70%时，以体积分数0.25%胰酶消化，使瓶底细胞都浸入溶液中，