月见草花提取物对免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响

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1、月见草花提取物对免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响：邓丽，王琦，赵建宁，王宁萍，周娅【摘要】目的探讨月见草花两种提取物对免疫抑制小鼠细胞免疫功能的影响。方法小鼠腹腔注射环磷酰胺(Cyclophosphamide，Cy)50mg/kg建立免疫抑制模型，然后将月见草花两种提取物分别以高、中、低三个剂量(低剂量437.5mg/kg、中剂量875mg/kg和高剂量1750mg/kg)每天1次灌胃，观察对小鼠脾脏T淋巴细胞增殖能力、肿瘤坏死因子-α(TumorNecrosisFactorα，TNF-α)和干扰素-γ(Interferonγ，IFN-

2、γ)分泌水平的影响。结果月见草花的两种中剂量提取物均可增加免疫抑制小鼠脾脏T淋巴细胞刀豆蛋白A(concanavalinA，ConA)刺激指数(SI值P<0.05)，促进免疫抑制小鼠细胞因子TNF-α的分泌(P<0.05)，中剂量的月见草花乙酸乙酯提取物还可以增加细胞因子IFN-γ的分泌水平(P<0.05);月见草花乙酸乙酯提取物对免疫抑制小鼠细胞免疫功能的促进作用显著强于水提取物(P<0.05)。结论月见草花乙酸乙酯提取物和水提取物均可明显增强环磷酰胺免疫抑制小鼠的细胞免疫功能，其中乙酸乙酯提取物的作用优于水

3、提取物。【关键词】月见草花;小鼠;细胞免疫月见草(OenotherabiennisL)，又名夜来香，为柳叶菜科月见草属植物。我国自1936年引种后，在黑龙江、吉林、辽宁、江苏、江西和宁夏等分布广泛，做为油药植物大面积栽培[1]。月见草的食药两用性以及美容效果在国际中已有广泛共识，现代医学证明，月见草有卓越的抗炎，抗氧化，抗血栓，降血脂，抗肿瘤，保护神经细胞[2]，缓解经前症候群[3]，减肥及抗衰老等作用[4]。本文旨在观察月见草花两种提取物对环磷酰胺免疫抑制小鼠细胞免疫的影响。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1实验动物ICR

4、小鼠，8周龄，体重18～22g，雌雄各半，由宁夏医科大学实验动物中心提供。　　1.1.2实验试剂和仪器月见草花为宁夏产月见草的干花(购于宁夏荣康月见草种植基地)，乙酸乙酯(Ethylacetate，EAc)提取物是经乙醇提取后再用乙酸乙酯提取的浸膏，每克浸膏生药含量为148g;水提取物采用煎煮法制备浸膏，每克浸膏生药含量为23g。环磷酰胺(Cyclophosphamide，Cy)为江苏恒瑞医药股份有限公司产品。绵羊红细胞、豚鼠血清(宁夏医科大学实验动物中心提供)，小鼠TNF-α、IFN-γ检测试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司提供)，

5、ConA、MTT、RPMI-1640培养基(Sigma公司产品)。　　1.2方法　　1.2.1实验动物分组及给药方法ICR小鼠80只，随机分为8组，每组10只，雌雄各半。第1组为正常对照组：每日用生理盐水20mL/kg灌胃1次，共8d;第2组为模型组：每日用生理盐水灌胃1次，于第5天腹腔注射Cy50mg/kg;第3、4、5组为月见草花乙酸乙酯提取物组：分别按低剂量437.5mg/kg、中剂量875mg/kg和高剂量1750mg/kg每天灌胃1次，持续8d，并于第5天腹腔注射Cy50mg/kg;第6、7、8组为月见草花水提取物组：分别按

6、低剂量437.5mg/kg、中剂量875mg/kg和高剂量1750mg/kg每天灌胃1次，持续8d，并于第5天腹腔注射Cy50mg/kg。第9天测定各项免疫学指标。　　1.2.2脾脏T淋巴细胞增殖能力的测定[5]无菌取脾，置于盛有Hank's液的平皿中研磨过滤，除去结缔组织、裂解红细胞，经培养液重悬后进行计数。将脾细胞浓度配成5×106/mL，加有丝分裂原ConA于96孔培养板进行培养，同时设不加ConA的对照孔，孵育68h。每孔加入10μLMTT作用4h，加细胞裂解液，在490nm波长处用酶标仪测定光密度OD值。增殖反应以ConA刺

7、激指数SI表示，按下式计算：SI=实验组平均OD值/对照组平均OD值。　　1.2.3细胞因子的分泌水平测定小鼠眼眶放血于Eppendorf管，将所取的小鼠血液于室温静置一段时间，分离血清后离心，-20℃保存待测。小鼠TNF-α、IFN-γ的检测按照试剂盒的说明进行操作，通过测定450nm波长处的OD值经标准浓度曲线计算出细胞因子浓度。　　1.3统计学方法　　采用SPSS12.0软件，实验数据以(±s)表示，采用单因素方差分析进行组间差异的比较。　　2结果　　2.1小鼠免疫抑制模型制备　　与正常对照组比较，模型组小鼠脾淋巴细胞ConA刺

8、激指数SI值和细胞因子TNF-α、IFN-γ的分泌水平均明显降低(P<0.05)，表明小鼠免疫抑制模型制备成功，见表1。　　2.2月见草花提取物对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响　　与模型组比较，月见草花乙酸乙