4种油松针叶dna提取方法比较

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1、4种油松针叶DNA提取方法比较摘要：采用ＳＤＳ法、简易提取法、高盐沉淀法和改良的ＣＴＡＢ法从油松（Ｐｉｎｕｓｔａｂｕｌａｅｆｏｒｍｉｓ）针叶提取基因组ＤＮＡ，通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和ＰＣＲ检测提取的ＤＮＡ质量。结果表明，改良的ＣＴＡＢ法提取的油松针叶基因组ＤＮＡ浓度和纯度高，适合用于ＩＳＳＲ－ＰＣＲ分析，优于其他３种提取方法。关键词：油松（Ｐｉｎｕｓｔａｂｕｌａｅｆｏｒｍｉｓ）；ＳＤＳ法；简易提取法；高盐沉淀法；改良的ＣＴＡＢ法；ＤＮＡ提取中图分类号：Ｓ７９１．２５４；Ｑ９４６．２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８1

2、14（２０12）17－3876-03ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＦｏｕｒＭｅｔｈｏｄｓｏｆＤＮＡＥｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｒｏｍＮｅｅｄｌｅｓｏｆＰｉｎｕｓｔａｂｕｌａｅｆｏｒｍｉｓＬＩＭｉｎｇ1a，ＹＵＡＮＳｈｅｎｇ－ｌｉａｎｇ1b，ＧＡＯＢａｏ－ｊｉａ1c，2（１ａ．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆLｉｆｅSｃｉｅｎｃｅｓ；１ｂ．ＧｒａｄｕａｔｅSｃｈｏｏｌ；１ｃ．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆFｏｒｅｓｔ，ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＨｅｂｅｉ，Ｂａｏｄｉｎｇ5０７１００1，Ｈｅｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ；２．ＨｅｂｅｉＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉ

3、ｔｙ，Ｚｈａｎｇｊｉａｋｏｕ０７５０００，Ｈｅｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＳＤＳｍｅｔｈｏｄ，ｓｉｍｐｌｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ｈｉｇｈｓａｌｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄａｎｄｍｏｄｉｆｉｅｄＣＴＡＢｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅａｐｐｌｉｅｄｔｏｅｘｔｒａｃｔＤＮＡｆｒｏｍｔｈｅｎｅｅｄｌｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅｐｉｎｅ（Ｐｉｎｕｓｔａｂｕｌａｅｆｏｒｍｉｓ）．ＡｎｄｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆｅｘｔｒａｃｔｅｄＤＮＡｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙａｇａｒｏｓｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＵＶｓｐｅｃｔｒｏｐ

4、ｈｏｔｏｍｅｔｒｙａｎｄＰＣＲ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｔｙｏｆＤＮＡｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｍｏｄｉｆｉｅｄＣＴＡＢｍｅｔｈｏｄｗａｓｂｅｔｔｅｒｔｈａｎｔｈａｔｆｒｏｍｔｈｅｏｔｈｅｒ３ｍｅｔｈｏｄｓ，ａｎｄｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄｉｎＩＳＳＲ－ＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓｏｆＰ．5ｔａｂｕｌａｅｆｏｒｍｉｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｉｎｕｓｔａｂｕｌａｅｆｏｒｍｉｓ；ＳＤＳｍｅｔｈｏｄ；ｓｉｍｐｌｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ；ｈｉｇｈｓａｌｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈ

5、ｏｄ；ｍｏｄｉｆｉｅｄＣＴＡＢｍｅｔｈｏｄ；ＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ油松（Ｐｉｎｕｓｔａｂｕｌａｅｆｏｒｍｉｓ）是中国特有树种，是构成中国北方温带针叶林的主要建群树种之一，其适应性强、树形美观、四季常青，可作为重要的工业用材、荒山造林和城镇绿化树种。目前对油松分子水平的遗传变异已有一定研究［１－４］，但由于油松含有大量次生物质，属于顽拗植物，提取高质量的基因组ＤＮＡ具有一定难度，是制约实验进展的关键因素之一［５－１２］。本研究在总结目前常用的几种植物基因组ＤＮＡ提取方法的基础上，采用SDS法、简易提取法、高盐沉淀法和改良的CTA

6、B法４种方法从油松针叶中提取总ＤＮＡ，并通过琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度法对提取效果进行评估和检测，以期为油松的分子生物学和群体遗传学研究奠定基础。１材料和方法１．１材料与仪器5实验用油松材料于２００９年７月采于河北省辽河源国家级森林公园（北纬４１°００′－４１°１０′，东经１１８°３０′－１１８°４０′），采集当年生幼嫩针叶置于冰盒中带回实验室，于－７０℃超低温冰箱中保存。提取ＤＮＡ之前用７０％的乙醇（体积分数，下同）清洗表面或浸泡１ｍｉｎ以去除外源的ＤＮＡ污染，并用灭菌水冲洗干净。ＴＧＬ１６Ｍ离心机，长沙易达技贸有限公司；ＨＨ

7、－４水浴锅、ＨＹ－５回旋式振荡器，金坛市杰瑞尔电器有限公司；ＬＳ－ＣＳＯＬ型立式灭菌锅，北京瑞泽康生物科技有限公司；ＤＹＹ－２Ｃ电泳仪，北京市六一仪器厂；凝胶成像仪，Ｂｉｏ－Ｒａｄ；９７００型ＰＣＲ仪，ＡＢＩ。１．２油松针叶基因组ＤＮＡ的提取１．２．１ＳＤＳ法①取油松针叶２ｇ，加液氮研磨成粉末，加入１ｍＬＳＤＳ提取缓冲液（１５ｍｇ／ＬＳＤＳ、１００ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ、２０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ、５００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，ｐＨ８．０）和１／５体积１０％ＳＤＳ提取液（０．１ｇ／ＬＳＤＳ、１００ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ、２

8、０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ、５００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，ｐＨ８．０）于１．５ｍＬ离心管中，６５℃水浴１ｈ；②加入１／１０体积的５ｍｏｌ／ＬＫＡｃ，冰浴３０ｍｉｎ，４℃、１００００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ；③取上清液，加入等体积的Ｔｒｉｓ酚－氯仿－异戊醇