细菌性阴道病联合测定试剂盒标准操作规程

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1、山大二院检验科门诊化验室项目SOP文件文件编号：JYKMZHYS第2010年版第1次修改分发部门：门诊化验室保管部门：办公室细菌性阴道病联合测定试剂盒标准操作规程（干化学酶法）1.原理本品检测包括过氧化氢H2O2（阴道乳酸杆菌的标志物）、唾液酸苷酶（加德纳菌、游动弯曲杆菌等BV致病菌的标志物）和白细胞酯酶LeukocyteEsteraseLE（炎性细胞的标志物）三项指标。1.1过氧化氢浓度测定阴道液中过氧化氢经过氧化物酶作用，释放出新生态氧，后者在4-氨基安替比啉存在下，使3,5-二氯-2-羟基苯磺酸氧化呈红色或紫色，在反应系统中加入3,5-二

2、氯-2-羟基苯磺酸的拮抗物，当样品中H2O2浓度≥2umol/L，反应结果呈红色或紫色，呈色深度与H2O2浓度成正比；样品中H2O2浓度＜2umol/L，反应结果呈蓝色。1.2唾液酸苷酶活性测定：唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐，释放出溴吲哚基，遇重氮盐起反应呈色，呈色深度与唾液酸苷酶活性成正比。1.3白细胞酯酶活性测定：白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐，释放出溴吲哚基，后者在有氧的条件下呈蓝色或绿色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。2.组成2.1BVSet反应装置：铝箔包装，有上中下三个反应孔，分别为H2O2、SN

3、A、LE孔，20支。2.2稀释液：MES[2-(N-吗啉代)乙烷磺酸]缓冲液：10mmolpH6.5、含NaCl0.9%，8m1/瓶，1瓶。2.3显色液：固紫B盐0.15%，1.5m1/瓶，1瓶。2.4无菌棉签20支、软塑料试管20个。编写人：孟静批准人：庞力启用时间：2007年12月时间：2007年11月时间：2007年12月修改时间：2010年06月山大二院检验科门诊化验室项目SOP文件文件编号：JYKMZHYS第2010年版第1次修改分发部门：门诊化验室保管部门：办公室1.1使用说明书1份。2.样品采集和处理2.1受检者的准备取样品前24

4、小时应禁止性交、盆浴、阴道灌洗及局部上药等，以免影响检查结果。经期样品会对结果判读有影响，所以不宜做该项检测。2.2样品的采集受检者取妇科检查常规体位，使用专用棉签于阴道后穹窿处旋转10-20秒，以清晰见到棉签上有分泌物附着为准。如果使用的棉签太短或棉球太小都不能保证取得适宜的样品，这些都会影响到检测结果。建议使用厂商赠送的棉签，取样前棉签不得做任何处理，包括使用消毒剂及任何液体。如不使用厂商赠送的棉签，则应保证棉签长度、棉球大小与厂商赠送的尽可能相同；应保证棉签是经过高温消毒的，但不能用环氧乙烷消毒，后者影响结果。2.3样品的处理将带有样品的

5、棉签放入厂商赠送的软塑料试管中，加400μl稀释液或用稀释液滴瓶垂直滴加14-16滴，反复挤压棉签，使分泌物溢出。样品应及时检测，不能及时检测的样品应保存在2-8℃，但应在8小时内完成检测。3.仪器3.1微量移液器（100µl、1000µl）3.2恒温水浴箱（37℃）或干浴器,推荐使用恒温水浴箱。4.操作步骤4.1将试剂盒从2-8℃取出，平衡到室温开始使用4.2撕开铝箔包装，取出反应装置，轻轻揭掉反应孔上的铝箔条。注：开封后的反应装置，须避光放置，并在当天使用完毕。4.3在反应装置的三个孔中每孔滴加一滴处理过的样品，约35µl，以没过反应孔1/

6、2为宜，之后在“唾液酸苷酶”反应孔中滴加一滴“显色液”。编写人：孟静批准人：庞力启用时间：2007年12月时间：2007年11月时间：2007年12月修改时间：2010年06月山大二院检验科门诊化验室项目SOP文件文件编号：JYKMZHYS第2010年版第1次修改分发部门：门诊化验室保管部门：办公室1.1将反应装置放在37℃水浴箱中显色15分钟，判读结果。如使用干浴器则严格按如下要求操作：a．使用的环境温度：18-25℃b．设定温度44~48℃，建议使用48℃c．开机预热不少于10分钟d．反应时间15分钟1.2检测完毕后，将试剂盒放回2-8℃保

7、存。特别提示：试剂盒各组分要求使用同批号产品。2.结果判读特别提示：反应结束后，应立即判读结果。2.1过氧化氢（反应装置上部的反应孔）：正常时显红色、紫色或蓝紫色；不正常时显蓝色。如显灰色或灰蓝色，则为样品稀释过度，建议重新采样或判读为正常。2.2唾液酸苷酶（反应装置中部的反应孔）：不显色或黄色为阴性，显棕黄色为脓性、血性样品以及脓稠分泌物所致，应判读为唾液酸苷酶阴性；显红、紫色或蓝色为阳性，显蓝色表示唾液酸苷酶活性浓度很高。2.3白细胞酯酶（反应装置下部的反应孔）：参照标准比色板。“-”和“±”表示白细胞酯酶阴性，“+”、“++”、“+++”

8、表示白细胞酯酶阳性。3.技术参数3.1重复性：3.1.1批内重复性：≥90%3.1.2批间重复性：≥90%3.2最低检出量过氧化氢≥2µmol/L、唾