人ctni抗原性及测定标准化的研究进展

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1、人cTnI抗原性及测定标准化的研究进展人cTnI抗原性及测定标准化的研究进展人cTnI抗原性及测定标准化的研究进展诊断学理论与实践2005年第4卷第l期人cTnl抗原性及测定标准化的研究进展洪理泉.郑佐娅(上海第二医科大学医学检验重点实验室,上海200023)关键词:心肌型肌钙蛋白;抗原性;标准化中图分类号:R392,11:R331.31文献标识码:C文章编号:1671?2870(2005)01?0083?03上个世纪90年代起.心肌肌钙蛋白(cTn)用于临床诊断心肌损伤.由于心肌肌钙蛋白I(cTnI)~检出微小心肌损害,现已成为心肌细胞损伤敏感度和特

2、异度最强的标志物之一,是快速诊断急性心肌梗死(AMI)和急性冠脉综合征(acutecoronarysyndromes.ACS),协助ACS危险分级和反映其预后的主要生化标志.大量临床研究表明cTnI在诊断心肌损伤时有高度的特异度及灵敏度.是诊断心肌损伤的”金标准”.cTnl的生物学特性肌钙蛋白(Tn)由TnI,TnT和TnC3个亚单位组成,其中TnI是抑制性亚单位.可抑制肌球蛋白与肌动蛋白组合,阻止肌肉收缩:TnT是与原肌球蛋白结合的亚单位;TnC是与钙离子结合的受体.TnI有3种亚型:分子量分别为24ku的cTnI,20ku的快骨骼肌(tTnI)和慢

3、骨骼肌肌钙蛋白I(sTnI).cTnI与sTnI的氨基酸序列有40%的异源性.cTnI氨基端有31个氨基酸是sTnI所不具有的.主要区别在l,2,3位外显子.cTnI的l,2,3位外显子较长,可编码N端的47个氨基酸.而sTnI的l,2,3外显子短,只能编码N端21个氨基酸.较cTnI短26个氨基酸.5,6,7外显子在cTnI和sTnI具高度同源性.人cTnI由基因TNNI3编码,TNNI3位于19ql3.4.全长6.2kb,其编码的cTnI为209个氨基酸多肽.相对分子量为24ku.淋巴细胞增殖活性(PI)为9.87.cTnI在心肌细胞中有2种存在形

4、式,其大部分以结构蛋白的形式存在于心房肌和心室肌细胞中.3%的cTnI游离于心肌细胞的胞质内,在心肌细胞膜完整状态下.cTnI不能透过细胞膜进入血循环.心肌损伤时.游离部分先释放入血.4～6h就能检测到cTnI的异常,并可维持5～7d,当心肌损伤时,外周血中90%以上的cTnI,仍然以cTnI—cTnC复合物形式存在.游离的cTnI较少.人cTnI基因是在心肌特异表达的,Bodor等运用cTnI特异的单抗,对不同来源的人肌肉组织冰冻切片进行免疫组化染色,同时用免疫荧光法测定组织匀浆中的cTnI水平.实验结果表明,正常胎儿和成人的骨骼肌组织及所有的多肌炎

5、和假肥大型肌营养不良症患者的组织中都没有cTnI表达.cTn1分子的抗原性Ferrieres等【lJ曾用68条能覆盖cTnI全长序列的多肽做?综述?抗原表位识别及二级结构推断实验,l6种鼠抗人cTnI单克隆抗体至少能分别识别肽段中1个表位,说明抗cTnI单抗识别抗原表位并不依赖蛋白的3级结构,同时用抗cTnI多克隆抗体作对比试验发现cTnI大部分序列都具抗原性,且以N.端,C.端抗原性最强.用精确的2级结构推断方法显示.cTnI是包含5个螺旋的蛋白质,5个螺旋为:A42～77aa,B90～135aa,C145～l59aa,D168～176aa和El82

6、～197aa.of螺旋间由短的无序序列隔开,N.端第1个无序序列有抗原性.其他无序序列均无抗原性.D螺旋无抗体识别表位即无抗原性.由下列抗原表位识别表(见表1)显示抗原表位主要集中在N.端:抗原表位分析及2级结构推断表明cTnI不是球蛋白.而是一种更为延伸的构象,这使分子中大部分氨基酸序列均能被免疫系统识别,即大部分序列都有抗原性.表1抗cTnl单克隆抗体识别表位单克隆抗体(实验室命名)识别序列抗原表位位置(aa)Filatov等171用游离的cTnI和Tn复合体分别去免疫小鼠.得到l6株抗游离cTnI单抗和l5株抗Tn复合体中cTnI的单抗,用重叠的

7、,能覆盖cTnI全长序列的人丁合成l0肽.并采用斑点技术来研究抗原表位识别位点,在总共3l株单抗中.28株单抗能与人工合成的l0肽相互作用.表明其可识别线性表位.用游离的cTnI免疫小鼠得到的l6株单抗优先识别cTnI的N.端和C.端,用Tn复合体免疫小鼠得到的l5株单抗中9株识别cTnI的N一端,可见抗原表位主要集中在N.端.比较得出既能识别游离cTnI又能识别Tn复合体中cTnI的l3株单抗识别的抗原表位位置为:l6～20aa,25～29aa,25～33aa,34～37aa,4l～49aa,56～6laa,87～92aa,87～9laa,102～l

8、09aa,l33～l39aa,l68～l75aa,l89～l95aa和l90～196aa处.血