蚊虫抗药性检测方法 生物测定法

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1、蚊虫抗药性检测方法生物测定法1范围本标准规定了测定蚊虫对有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类等杀虫药剂抗药性的诊断剂量法和敏感基线法。本标准适用于淡色库蚊、致倦库蚊、白纹伊蚊、中华按蚊等蚊虫抗药性的生物测定。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1敏感基线所测蚊虫的敏感品系对某种杀虫剂的毒力回归线。2.2诊断剂由敏感品系的敏感基线计算得到的与死亡率99%或99.9%相对应的杀虫药剂剂量值(LC99或LC9⒐9),一般以2倍LC99或LC9⒐9值区别抗性和敏感种群。2.3F1代采集的样本繁殖后的第一代蚊虫。3试虫样本多点采集。幼虫浸渍法采用F1代四龄幼虫。成蚊接触筒法采用

2、野外采集的幼虫或蛹羽化后,3d~5d未吸血雌蚊。4试剂丙酮、乙醚、白油、杀虫剂原药等。5仪器蚊笼、滤纸、吸蚊器。6测试条件温度:25℃±1℃,光周期:⒕L:10D,相对湿度:60%~80%。7敏感基线法7.1原理依据杀虫剂应用剂量和死亡机率值关系建立毒力回归方程,以敏感品系得到的杀虫剂毒力回归线作为敏感基线。以待测昆虫种群得到的杀虫剂毒力回归线与敏感基线对比,来确定待测种群的抗性水平。具体是比较两条毒力回归线的D值变化以及回归线计箅得到的半数致死量的变化。7.2操作步骤7.2。l幼虫浸渍法每只烧杯量入149mL脱氯自来水。待测药用丙酮等比例或等差稀释至一个系列浓度,通过预实验

3、确定药剂浓度系列范围最低浓度时幼虫死亡率小于20%最高难度大于8O%,然后吸取1mL已配制好的药液滴入水面上，用玻璃棒搅匀，然后把另一杯中预先挑选的幼虫（30只）连同50mL%~80%的水全部注人烧杯内,合计200mL水溶液整个实验保持在25℃±1℃,相对湿度60%~80%的温室内,24h后检查死亡数死亡率剂量取对数、将死亡率转换为概率单位进行回归，求出LD50值。7.3死亡判断7.3.1幼虫浸渍法轻轻触动幼虫,以不能逃避剌激视7.4结果表述结果用抗性倍数表述,抗性倍数=待测种群LC50值/敏感种群LC5°值。7.5判别标准敏感品系和所测样本之间95%置信限不重叠,且抗性倍数

4、≥5倍为抗性种群。