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1、不同药物对维氏气单胞菌的抑菌作用研究水产养殖2006级于书萍指导老师：黄小丽摘要：以28种常见药物为材料，测定了其对斑点叉尾鮰的维氏气单胞菌的生物学活性，结果表明，在所试的28种化学试剂中，以环丙沙星、氟苯尼考、奥福星、美福仙、罗美沙星、左氟沙星等共计14种对该菌有较强的抑制作用，而以前水产养殖中常用的四环素、青霉素、红霉素等对此病原菌无抑菌作用或作用不明显，显示出病原菌对其可能已具有抗性，不适合作为它的抑菌药物。关键词：斑点叉尾鮰抑菌性MIC前言：斑点叉尾鮰是一种温水性淡水鱼类，适温范围0-38℃，生长摄食温度为5-36℃，最适生长温度
2、为18-34℃，最佳摄食温度为18-30℃，当水温超过39℃时会出现呼吸变慢、行动呆滞等不良反应。在溶氧为3mg/L时能正常生长，当低于0.5mg/L会出现死亡现象．对pH值的适应范围为6。5-9.0，对盐度的适应值应小于1‰【12】斑点叉尾鮰有密而细的口腔齿和咽喉齿，属于有胃鱼类，行动敏捷，体色较深．一般认为它属肉食性鱼类.在我国养殖面积比较广，有着较好的经济价值。然而随着养殖面积的不断扩大，养殖水域环境的日益恶化，斑点叉尾鮰的病害越来越严重，给广大的渔民朋友们带来了巨大的经济损失。【3】目前对水产养殖动物细菌病进行控制的主要手段是采用
3、抗菌药物治疗。但由于对病原学、药理学等方面认识不全面,在养殖过程中存在高剂量多种药物混合使用等滥用、乱用药物现象,虽然对杀灭病原菌有一定的效果,但毒副作用明显,长期使用,易导致病原微生物产生抗药性。因此,在使用药物治疗细菌性疾病之前,必须测定该药物对病原菌的敏感性研究。【4】对于水产病原的药物敏感性的研究大都采用测定MIC，MBC等方法，目前报道的测定MIC的方法有液体法和平皿法，斜面法，其中由于液体法不能测定出不溶性药物的MIC，故使用较少，以平皿法使用居多，平皿法是将细菌点种在含药平板上，足够药液浓度便可抑制细菌生长，可较快筛选药物，
4、斜面法是在一系列试管中，以普通肉汤培养基按倍比稀释法稀释药液，每管加入等量的含菌普通肉汤和加入琼脂量为2.6%的琼脂培养基,使最终菌量为104CFU/ml、摇匀、摆成斜面;适宜温度下培养16-18h观察实验结果,记录无菌生长的最低药物浓度,即为该药的最低抑菌浓度[1].1:材料与方法1、试验材料试验对象：斑点叉尾鮰维氏气单胞菌（四川农业大学实验室）主要试剂：药敏纸片，蛋白胨，牛肉膏，氯化钠，琼脂，蒸馏水，主要仪器：光学显微镜，培养皿，镊子，烧瓶，酒精灯，PH试纸，平板。2、试验方法2.1实验准备2．1．1培养基的配制采用以下配方：蛋白胨1
5、0g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，pH7.2。将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，分装于培养皿内，121℃，15min高压灭菌备用。2．1．2药物敏感性试验【5】将28℃恒温培养18～24h的菌落,用生理盐水制成105CUF菌悬液均匀涂抹在平板上,贴上药敏试纸,置恒温箱内24h后观察并制表。抑菌圈直径≤14mm为敏感,15-17mm,为中敏感,≥18mm为高敏感。实验重复3次。2．1．3氟苯尼考等4种敏感药物MIC的测定【6】取菌悬液1ml,加入含8ml液体培养基的无菌试管中；再吸取每种各药敏
6、纸片原药稀释液（6.4mg/ml）各5ml,沿管壁注入装有5ml灭菌生理盐水的灭菌试管内,摇匀制成2倍稀释液。按上述操作顺序,制成6个浓度梯度,它们的浓度依次为:0.64、0.32、0.16、0.08、0.04、0.02mg/ml；再从6个不同浓度梯度试管中分别吸取1ml药物稀释液,依次加入到各种细菌稀释液中混合均匀,置28℃培养箱中培养24h,取出后观察测定最小抑菌浓度(MIC)并制表。2.结果与讨论2.1.药敏实验用纸片法对病原菌维氏气单胞菌菌株进行药物敏感性试验，结果见表1，表1:不同药物对维氏气单胞菌的抑制作用药物名称代号抑菌圈半
7、径cm药物含量判断标准是否敏感乙酰螺旋霉素乙1.0磺胺异恶唑磺2.3氯霉素氯2.4四环素四1.8罗美沙星罗3.0多粘霉素多0.7新生霉素生0.7链霉素链2.1丁胺卡那霉素丁1.6氯洁霉素洁0.6妥布霉素妥1.6麦迪霉素麦0.9新霉素新1.1美满霉素满1.2氟苯尼考尼3.1奥福星奥2.5美福仙美2.7青霉素青0.7恩诺沙星恩2.4利福平利1.5左氟沙星左3.2红霉素红1.8复方新诺明复2.3卡那霉素卡1.8克拉霉素克1.8痢特灵痢1.2环丙沙星环2.9阿奇霉素奇2.6注：每种药物含药量均为30ug/片。2.2MIC值测定从药敏实验所得结果中
8、选择4种抗菌能力较好的药物采用两倍稀释法对维氏气单胞菌菌株作MIC值测定(表2)。表2:药物对维氏气单胞菌的MIC值药物mg/ml0.640.320.160.080.04MIC值mg/ml氟苯
