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《微生物量碳和酶活性的测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、微生物量碳测定（此指标是反映土壤中微生物总量---群落大小的一个指标）称取经前处理相当于20-g烘干基的新鲜土样，盛装在50ml的烧杯中，放置于真空干燥器中，并放置盛有去乙醇的氯仿（约2/3烧杯）的50ml烧杯1只，烧杯内放入少量沸石(洗净烘干的瓷片，0.5mm大小)，用真空泵抽空使氯仿沸腾5分钟，关闭真空干燥器阀门，在室温避光下熏蒸24小时。熏蒸24小时结束后，打开干燥器的阀门，取出盛装有氯仿的烧杯，然后用真空泵抽空3-4次（每次抽真空后应慢慢的打开阀门），使渗透到土样中的氯仿全部被排除。熏蒸结束后将土样转移到250ml的三
2、角瓶中，三角瓶中加入80ml0.5MK2SO4溶液震荡1小时，用中速定量滤纸过滤，并收集滤液。重复两次。过滤时添加空白2个。提取液应立即分析，或在－18℃下保存。在熏蒸的同时，称取另外两份鲜土样直接加入80ml0.5MK2SO4溶液震荡1小时，后过滤收集滤液。重复两次。过滤时添加空白2个。注意，低温（－18℃）下保存的土壤提取液，解冻后会出现一些白色沉淀，不必除去，但取样前应充分摇匀。提取液中的碳用总碳分析仪测定。（稀释20倍—吸取2.5ml到50ml容量瓶，上机。）试剂准备：氯仿；硫酸钾。标准曲线：00.5135微生物生物量
3、碳(Bc)用下面公式计算:Bc=Fc/Kc。式中Fc为熏蒸与不熏蒸土壤在培养期间CO2的释放量的差值,Kc为熏蒸杀死的微生物量中的碳在培养过程中被分解,并以CO2释放出来的比例,目前一般都采用0.45。(一般用K2Cr2O7氧化法测定有机碳,Kc为0.33～0.38;TOC分析仪测定,Kc一般为0.45)酶活性的测定包括脱氢酶（Dehydrogenase），脲酶（Urease），精氨酸水解酶，碱性磷酸酯酶，b-葡萄糖酶等。脲酶（Urease）和精氨酸水解蛋白酶（N-a-benzoyl-L-argininamide,BAA）活性
4、的测定。两种测定所用的缓冲液均是0.1M磷酸盐，pH为7。1M的尿素溶液和0.03M的BAA分别用作基质。2ml缓冲液和0.5ml基质溶液加入0.5g的土壤中，在30度（脲酶）或者39度（蛋白酶）下恒温培养90min。两种酶的活性均以水解反应中形成的NH4+量来衡量。b-葡萄糖苷酶(b-Glucosidase)的测定：参考文献：1.TabatabaiM.A.,1982.Soilenzymes.InMethodsofSoilAnalysis,Part2.ChemicalandMicrobiologicalProperties-A
5、gronomyMonographNo.(secondEdition),pp903-9472.HopkinsD.W.,SparrowA.D.,Shillam,L.L.,English,L.C.,Dennis,P.G.,Novis,P.,etal.,2008.EnzymaticactivitiesandmicrobialcommunitiesinanAntarcticdryvalleysoil:ResponsestoCandNsupplementation.SBB.Doi:10.1016/j.soilbio.2008.03.022
6、称取相当于烘干基1g新鲜土壤样品置于30ml试管（或50ml的容量瓶）中，加入4mlpH6.5的缓冲液和1ml0.025M的对硝基苯基-b-D-葡萄糖苷（p-nitrophonyl-b-D-glucopyranoside，充分混合后塞上瓶塞在37度下培养1小时，然后加入1ml0.5MCaCl2和4mlpH为12的0.1Mtris-NaOH缓冲液，摇动悬液几秒钟。悬浊液立刻通过Whatman2滤纸过滤。最后在400nm测定（黄色溶液的）吸光值。(SBB2008,Trasar-Cepeda;SBB2008,Hopkins;Geod
7、erma2005,Caravacaetal.)重复两次。每个土样做相应的对照1个，并做无土对照两个。如果土样测定值超出标准曲线的范围，可进行适当的稀释。标准曲线的制作：将10ml标准对硝基酚标准溶液稀释到100ml的容量瓶中，充分混合均匀(此溶液的浓度为100mg/L)。然后吸取此稀释后的标准溶液0，1，2，3，4和5ml分别在50ml的容量瓶中，加水至50ml(浓度分别为0、2、4、6、8和10mg/L)。吸取此系列标准溶液各5ml于容器中，然后，在与土壤酶提取液同样条件下在400nm下测吸光度。（即在每个色阶溶液中分别加入
8、1ml0.5MCaCl2和4mlpH为12的0.1Mtris-NaOH缓冲液，然后过滤，最后测定吸光值）。此标准曲线应现配现测。试剂配制：1.pH6.5的缓冲液保存液的配制：三羟甲基氨基甲烷[Tris(hydroxymethyl)aminomethane(THAM)]12.1
