三羊益心康胶囊对大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用

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三羊益心康胶囊对大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用作者：李伟李响王清陈颖丽付萍杨铭【摘要】　　目的观察三羊益心康胶囊的抗心肌缺血作用。方法采用结扎大鼠冠状动脉左前降支法制备急性心肌梗死模型，利用二导联心电图、定量和半定量组织学法、血液生化法和电镜法观察三羊益心康胶囊对心肌缺血损伤的保护作用。结果三羊益心康胶囊可明显缩小心肌梗死面积（MIS）(P＜0.01)，减轻缺血心肌的损伤程度(P＜0.01)，改善缺血心肌的心电图变化(P＜0.01)，并能显著降低血清AST、LDH和CPK含量(P＜0.01)。结论三羊益心康胶囊对大鼠急性心肌缺血具有明显的保护作用。【关键词】三羊益心康胶囊；麻醉大鼠；心肌缺血；保护作用　　三羊益心康胶囊是由吉林省中医药科学院自主研发的创新药物，主要由三七总皂苷及淫羊藿总黄酮组成，具有活血化瘀、温阳通痹的功效，临床上主要用于治疗冠心病心绞痛及心肌缺血性疾病。笔者曾报道“三羊益心康胶囊对麻醉犬血流动力学和心肌耗氧量的影响”及“三羊益心康胶囊对犬急性心肌缺血损伤保护作用的实验研究”〔1，2〕，为验证其确切的疗效及为临床应用提供更充分的科学依据，本实验采用另一种实验动物，即“结扎大鼠左冠状动脉前降支”8 方法制备急性心肌缺血模型，探讨该药对急性心肌缺血的保护作用。　　1材料与方法　　1.1药物　　三羊益心康胶囊，0.32g/粒，含药物0.125g/粒，由吉林省中医药科学院剂型室提供，批号：20000820。实验时取胶囊内容物用0.5%羧甲基纤维素钠（CMCNa）配制成3.00%、1.50%、0.75%浓度的混悬液备用。人口服用量1.92g/d，动物用剂量是人用量的22、11、5.5倍。阳性对照药正心泰胶囊由贵州奇凯制药有限责任公司生产(批号：20010101）。硝基四氮唑蓝（NBT），由上海灵锦精细化工有限公司提供(批号：298839)。天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、肌酸磷酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒，由南京建成生物技术研究所提供(批号分别为：010121；090121；130071)。　　1.2动物　　Wistar大鼠90只，雄性，体重250～300g。由吉林省药品检验所动物室提供。合格证编号：101009。　　1.3仪器8 　　CIMA400型图像分析仪（四川大学），BH2型OLYMPUS显微镜（日本），OLYMPUS全自动生化分析仪（日本）。　　1.4方法　　参照文献方法〔3〕，取雄性大鼠90只，随机等分为6组：对照组（假手术组），模型组（手术组），正心泰胶囊组（2g/kg），三羊益心康胶囊0.60、0.30、0.15g/kg组。对照组和模型组均给予0.5%CMCNa，灌胃给药，每日1次，连续5d，体积均为20ml/kg。于实验第6天，手术前做二导联心电图1次，然后以乙醚浅麻醉大鼠，背位固定，胸部去毛，酒精消毒，沿左锁骨中线纵行切开皮肤约2cm，在胸左侧第五肋间钝性分离肌层，并沿胸骨左缘2mm处纵行开胸，暴露心脏，剪开心包，轻压胸壁，挤出心脏。在动脉圆锥与左心耳之间冠状静脉处，用细小弯针结扎左冠状动脉前降支（左心耳下缘1mm处，假手术组不结扎）造成急性心肌缺血，立即将心脏放回胸腔，迅速缝合胸壁。于术后1h再灌胃给药1次，术后24h做如下检查：（1）测定二导联心电图，以结扎冠脉24h后心电图出现下列指征之一者即判定为心肌缺血阳性：T波高耸，J点升高0.1mV以上；T波低平（降低原T波高度的50%以上）、双向、倒置或心律不齐、心率减慢。T波高耸，J点升高0.18 mV以上，T波低平（降低原T波高度的50%以上）、双向、倒置或心律不齐、心率减慢。（2）腹主动脉取血，采用OLYMPUS全自动生化分析仪测定心肌三酶（AST、CK、LDH）。（3）将动物处死，摘取心脏，将心脏横切，置入pH7.4的硝基四氮唑蓝溶液中，于37℃恒温水浴中染色3min，采用CIMA400型图像分析仪分别测量心肌梗死面积（心肌梗死部分占心肌横断面面积的百分比）。（4）心肌损伤程度的半定量评价：心肌损伤程度按4级评定。0级：心肌未见明显坏死灶或仅有轻度间质水肿；1级：轻度心肌间质水肿，坏死心肌及变性心肌占总心肌面积1%～20%；2级：中度心肌间质水肿，坏死和变性心肌占总心肌面积21%～40%；3级：严重心肌间质水肿，坏死和变性心肌占总心肌面积41%以上。（5）心肌组织病理学检查。　　1.5统计学分析　　采用SPSS11.0统计软件，实验数据均以x±s表示，定量资料采用t检验，并进行单因素方差分析及组间均数差异的统计学分析，定性资料采用χ2检验方法分析。　　　　2结果　　2.1三羊益心康胶囊对心肌梗死面积的影响8 　　模型组动物心肌梗死面积明显增大，三羊益心康胶囊大、中、小剂量组和正心泰胶囊组均可明显减小心肌坏死面积，与模型组比较均有显著差异(P＜0.01)，并有一定的量效关系。三羊益心康胶囊大剂量组减少心肌梗死面积作用明显强于正心泰胶囊。见表1。　　2.2三羊益心康胶囊对心肌损伤程度的影响　　心肌缺血模型组动物心肌损伤程度较为严重，三羊益心康胶囊大、中、小剂量及正心泰胶囊均可明显减轻心肌损伤，与模型组比较均有显著差异，并有一定的量效关系。三羊益心康胶囊大剂量组作用明显强于正心泰胶囊。与上述心肌梗死面积定量测定结果基本一致。见表1。表1对大鼠心肌梗死面积、心肌损伤程度及心电图改变的影响(略)　　2.3三羊益心康胶囊对心电图变化的影响　　心肌缺血模型组心肌缺血阳性率高达90%，三羊益心康胶囊大、中、小剂量及正心泰胶囊均可改善结扎冠脉所致大鼠急性心肌缺血，心肌缺血阳性率在30%～70%之间，且以三羊益心康胶囊大剂量作用最为显著。见表1。　　2.4对AST、CPK、LDH活性的影响8 　　模型组大鼠血清中AST、CK、LDH含量较假手术明显升高，三羊益心康胶囊大、中、小剂量及正心泰胶囊均可显著降低心肌三酶活性，与模型组比较有显著性差异(P＜0.01)，且具有一定的量效关系。见表2。表2对AST、CPK、LDH活性的影响(略)　　2.5心肌组织病理学检查　　假手术组心肌纤维排列整齐，细胞核居中，多为一个，为正常心肌结构，未见心肌明显形态改变；心肌缺血模型动物内层心肌可见灶状坏死，坏死灶内肌纤维溶解，心肌间质明显水肿，可见典型的心肌梗死灶，表明心肌处于缺血性损伤状态；阳性药对照组心肌内层可见局灶性间质水肿，肌纤维呈局灶变性及小灶肌溶解，心肌损伤较模型组明显减轻；三羊益心康胶囊大、中、小剂量组内层心肌间质呈局灶水肿，可见微小坏死灶及心肌纤维嗜伊红浓染，变色酸2R染为粉色心肌区域明显减少，心肌梗死灶较模型组显著减轻，且尤以大、中剂量组更为明显，表明这些动物心肌缺血性病理改变得到明显改善见图1。　　3讨论　　血清心肌酶的变化是反映心肌梗死程度的重要指标〔4〕。三羊益心康胶囊可明显降低血清CPK、AST、LDH的含量，表明三羊益心康胶囊可减轻细胞膜的损伤程度，降低细胞膜的通透性，具有膜稳定性的作用。8 　　心肌缺血时，心电图产生异常改变，如T波高耸，J点升高0.1mV以上，T波低平（降低原T波高度的50%以上）、双向、倒置或心律不齐、心率减慢。因此，心电图的变化是反映心肌缺血的重要指标之一。三羊益心康胶囊大、中、小剂量及正心泰胶囊均可改善结扎冠脉所致大鼠急性心肌缺血，心肌缺血阳性率降低至30%～70%之间，且以三羊益心康胶囊大剂量作用最为显著。　　NBT染色法反映心肌损伤较为客观，由于NBT需与活性酶作用，正常心肌可被染成蓝色，心肌缺血性损伤达到一定程度时，组织中能量代谢障碍，酶活性降低或消失，故梗死区不着色。三羊益心康胶囊可明显缩小MIS，减轻心肌损伤程度，对缺血心肌病理组织学改变有显著改善作用，表明该药对结扎左冠状动脉前降支所致大鼠心肌缺血性损伤有明显的保护作用。提示该药可能通过降低心肌耗氧量，改善梗死区供血供氧功能，从而减轻心肌细胞损伤，改善心电图变化，降低CPK、AST、LDH活性，缩小心肌梗死面积，进而发挥抗心肌缺血作用。【参考文献】　　1李伟，付萍，陈颖丽，等.三羊益心康胶囊对麻醉犬血流动力学和心肌耗氧量的影响〔J〕.中国实验方剂学杂志，2008；14（12）：5560.8 　　2李伟，付萍，陈颖丽，等.三羊益心康胶囊对犬急性心肌缺血损伤保护作用的实验研究〔J〕.中国实验方剂学杂志，2008；14（10）：479.　　3徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学〔M〕.北京：人民卫生出版社，1991：93840.　　4吕文伟，计国义，赵丽娟，等.左旋氨氯地平对实验性心肌梗死犬心肌的保护作用〔J〕.吉林大学学报(医学版)，2003；29（1）：6971.8