大鼠海马脑区脑源性神经营养因子慢病毒注射与表达的检测

《大鼠海马脑区脑源性神经营养因子慢病毒注射与表达的检测》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、大鼠海马脑区脑源性神经营养因子慢病毒注射与表达的检测作者：张惊宇,李金星,孙永奇,赵虹,杨子超【摘要】目的:建立成年大鼠海马脑区注射脑源性神经营养因子(BDNF)慢病毒表达载体的方法,并检测BDNF慢病毒载体体内表达目的基因的能力。方法:健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH)、生理盐水组(NS)、GFP慢病毒注射组(GFP)和BDNF慢病毒注射组(BDNF),每组15只。所有实验大鼠在脑立体定位仪下定位海马组织。NS、GFP和BDNF组分别给予盐水（2μL）、GFP慢病毒（2μL）和BDNF慢病毒（2μL）,SH组只实行手

2、术操作。注射手术7d、14d和30d后,分别处死大鼠并进行在冰上取各组大鼠海马组织,分别提取海马总RNA和总蛋白质通过RTPCR和Westernblot检测各组大鼠海马组织BDNFmRNA和蛋白表达水平的变化。同时通过原位杂交方法检测BDNF的表达水平和脑区分布。结果:BDNF慢病毒注射成年大鼠7d、14d和30d后,均可以成功检测到BDNF在mRNA和蛋白水平在海马脑区都有明显的表达,同假手术组相比具有显著性差异;原位杂交检测显示BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区7d、14d和30d的BDNF表达水平和脑区分布均保持稳定

3、。结论:成功地建立了BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区的方法,并可在注射后不同时间段检测到BDNF高水平的表达和均匀的海马脑区分布,为进一步将其应用于神经系统损伤性疾病的治疗奠定了基础。14【关键词】BDNF;慢病毒;治疗性基因操作;海马注射［Abstract］AIM:ToexplorethemethodofinjectingtheBDNFgenelentiviralvectorinrathippocampusanddetectingitsexpression.METHODS:SDratswererandomlydivide

4、dintofourgroups:shamoperatedgroup(SH),normalsalinegroup(NS),GFPgenelentiviralvectorinjectiongroup(GFP)andBDNFlentiviralvectorinjectiongroup(BDNF).TheexpressionofBDNFwasdetectedbyWesternblot,RTPCRandsituhybridization(ISH)atday7,14and30aftertheinjection.RESULTS:BDNF

5、GenelentiviralvectorcanupregulatedtheexpressionofBDNFinrathippocampus.TheresultofRTPCRandWesternblotdetectionshowthatthelevelofmRNAandtheproteinlevelwasremarkablyincreased.TheresultofinsituhybridizationshowedthestableexpressionanddistributionofBDNF.CONCLUSION:Su

6、ccessfullyestablishedthemethodofinjectingBDNFgenelentiviralvectorinrathippocampusanddetectedthehighlevelofBDNFexpressionfollowingwiththetime,whichlaysthebasisforitsapplicationinthetreatmentoftheneurodamageddisease.14［Keywords］BDNF;lentiviralvector;genetherapy;rathi

7、ppocampus目前在许多神经系统疾病的治疗研究中,采用关键基因的过表达技术已成为新发展起来极有前景的治疗策略。基于人类免疫缺陷症病毒（HIV1）基础上制备的慢病毒载体,不易诱发神经系统的免疫反应,毒性较低,并可以介导长期而稳定的转基因表达,治疗基因表达时间可长达6个月,非常适用于神经损伤修复的大鼠动物模型实验［1,2］。本研究旨在探索建立成年大鼠海马脑区注射脑源性神经营养因子（brainderivedneurotrophicfactor,BDNF）慢病毒表达载体的方法,并检测BDNF慢病毒载体的表达水平及其脑区分布,探

8、讨BDNF慢病毒载体注射作为治疗成年大鼠脑损伤动物模型转基因操作技术的可行性。1材料和方法1.1材料高滴度eGFP慢病毒颗粒（2×109TU/mL）购自上海吉凯基因化学技术有限公司;高滴度BDNF过表达的慢病毒颗粒（5×108TU/mL）由本实验室构建并且包装浓缩。MAXIscriptki