1型糖尿病大鼠模型的建立及糖尿病并发症相关指标的测定

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1、1型糖尿病大鼠模型的建立及糖尿病并发症相关指标的测定作者：徐华何毅张鸣号李桂忠曹军【摘要】目的为了研究链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)诱导大鼠1型糖尿病模型的方法并观察糖尿病并发症指标的变化。方法采用一次性腹腔注射STZ(60mg·kg-1)，监测不同时点大鼠的空腹血糖、体重、饮水量及血浆中的丙二醛(maleicdialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)和一氧化氮(nitricoxide，NO)等指标。结果大鼠注射STZ60mg·kg-172h后血糖值达到成模标准，并逐渐出现糖尿病表现，观察7周，始

2、终满足成模标准，未见转复。糖尿病组大鼠肾脏及肝脏肥大指数较对照组增加(P<0.01)。糖尿病组大鼠较对照组相比血浆中脂质过氧化产物MDA水平升高，而SOD和NO水平下降(P<0.01)。结论本实验1型糖尿病模型大鼠造模成功且模型稳定，并出现了并发症发生的部分指标变化。【关键词】1型糖尿病;大鼠模型;血糖10近年来，随着人们生活水平的提高，糖尿病的发病率呈逐年上升的趋势，心血管、肾脏、视网膜等并发症日趋严重。1型糖尿病及其并发症的病因、发病机理尚未完全阐明，预防和治疗仍不完善，因此建立较理想的动物模型对研究该病的发病机制和治疗具有重要意义。目前，国内外普遍使用

3、链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病动物模型，但成模时间从48h至2个月不等[1-4]，模型的稳定性也无权威报道。本实验主要针对这一模型的制备方法进行探讨，并测定与糖尿病并发症的发生相关的部分指标。　　1材料与方法　　1.1实验动物选择和喂养雄性Sprague-Dawley大鼠，体重120～160g，清洁级，由宁夏医科大学实验动物中心提供。饲养室内通风良好，室温18～25℃，相对湿度40%～70%，每日12h光照维持，昼夜循环，饲养时间为9～11月份。自由摄食、饮水。　　1.2主要试剂和设备STZ(Sigma公司);微量血糖测定仪，美国强生稳豪(配套血糖试纸);MDA、SOD

4、及NO测试盒均购自南京建成生物技术有限公司;其余试剂均为市售分析纯。RC5C高速低温冷冻离心机(美国，Sorvall);Sartorius电子分析天平(德国);pH计(型号PB220，德国塞多利斯)。　　1.3STZ液配制将STZ溶解于0.1mol·L-1、pH4.5(pH计检测)、无菌的柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液中，制成浓度为12mg·mL-1(1.2%)的STZ液。其中，柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液是由0.1mol·L-1柠檬酸母液和0.1mol·L-1柠檬酸三钠母液按体积1.2∶1.310混合摇匀而成。　　1.4实验分组和模型建立雄性SD大鼠，所有大鼠适应性喂养1周，药

5、物注射前观察大鼠健康状况，1周内饮食正常、体重不减轻、血糖正常者即可用于实验。取上述大鼠20只(体重120～160g)随机分为两组(每组10只)：糖尿病模型组和正常对照组。实验前动物禁食12h，模型组一次性快速腹腔注射STZ液(60mg·kg-1);对照组腹腔注射等量的柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液。72h后血糖值≥16.67mol·L-1为模型组大鼠[5]。　　两组大鼠常规饲养，自由摄食、饮水。模型处理7周后，禁食12h测定血糖值，乌拉坦1g·kg-1腹腔注射麻醉，心脏取血，肝素抗凝，分离血浆，-70℃冻存备用做下述测定;称取全肝、双肾、心脏重量，计算肝/体重比、双肾/体重

6、比及心/体比值。　　注意事项：①STZ液和柠檬酸缓冲溶液必须低温(4℃)保存，新鲜配制;STZ液须避光保存，5min内用完。②大鼠禁食12h后注射STZ，注射后给予充足饮水及食物，每日换垫料1～2次，保持干燥。③采血部位涂以抗生素软膏，防止感染。④注射STZ后早期不宜较大量采血，因其可增加应激因素，影响结果。　　1.5观察指标和检测方法10　　1.5.1成模状况及血糖检测根据注射STZ72h后血糖值≥16.67mol·L-1为判断模型组大鼠模型的标准，计算成模率，并计算成模7周后大鼠的病死率。剪断尾尖取血，用血糖仪检测注射前(0d)及注射后3、7、14、28、42d和4

7、9d两组动物的血糖值。　　1.5.2一般情况定时观测大鼠体重、精神状态、形态、毛色、饮食饮水量、尿量等，实验结束时计算大鼠肝/体重、双肾/体重及心/体重比值(肥大指数)。　　1.5.3并发症相关指标测定按测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及一氧化氮(NO)试剂盒说明书，测定血浆中的MDA、SOD及NO等指标。　　1.6统计学方法　　数据以均值±标准差(±s)表示，两样本均数间比较采用t检验，多样本均数间比较采用One-wayANOVA检验，组间的两两比较采用Student-Newman-Keuls(SNK)方法检验，以P<