实验四蛋白酶活力的测定方法

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1、目录实验讲义第一部分啤酒工艺综合实验实验一还原糖的测定3实验二α-氨基氮的测定（茚三酮法）4实验三双乙酰（紫外分光光度法）5实验四总酸（电位滴定法）6实验五酒精度7实验六原麦汁浓度（蒸馏——密度法）9实验七真正发酵度(实际发酵度)10实验八协定法糖化和外加酶糖化法11第二部分通风发酵综合实验实验一淀粉质原料的水分测定12实验二原料中粗淀粉的测定13实验三还原糖的测定17实验四蛋白酶活力的测定方法19实验五糖化酶的测定方法22实验六玉米淀粉液化及糖化24实验七面包酵母流加培养与分批培养试验27实验八糖化

2、酶的发酵和提取实验31实验九酸性蛋白酶固态发酵实验3433第一部分啤酒工艺综合实验实验一还原糖的测定1原理本法是利用含有自由醛基的还原糖，在碱性溶液中，能将二价铜还原成氧化亚铜的性质进行测定。2仪器下端弯曲与管身成直角的滴定管。3试剂（1）0.1N硫代硫酸钠标准溶液配制：溶26克硫代硫酸钠及0.2克无水碳酸钠于1000ml水中。缓和煮沸10min，冷却。将溶液保存于棕色具塞瓶中，放置一周后过滤备用。标定：称取于120℃烘至恒重的重铬酸钾0.2克，称准至0.0002克，置于500ml具塞锥形瓶中，溶于2

3、5ml煮沸并冷却的水中，加2克碘化钾及20ml4N的硫酸。待碘化钾溶解后，于暗处放置10min，加250ml水，用0.1N硫代硫酸钠溶液滴定，近终点时加3ml0.5%淀粉指示剂，继续滴定至溶液由蓝色转变成亮蓝绿色。同时作空白试验校正结果。硫代硫酸钠标准溶液当量浓度N按下式计算：N=G/0.04903V式中：G——重铬酸钾的重量（克）V——硫代硫酸钠溶液的用量（ml）0.04903——每毫克当量重铬酸钾的克数（2）4N的硫酸溶液边搅拌边将56ml的浓硫酸小心地加入到约350ml蒸馏水中，并定容至500m

4、l。（3）0.5%淀粉溶液1.25g可溶性淀粉，加少量水调成糊状，在不断搅拌下注入200ml沸水中，微沸2min，冷却，加水稀释成250ml。（4）30%醋酸溶液取29.8ml无水乙酸，用水定容至100ml.（5）斐林溶液A.硫酸铜溶液溶34.639克硫酸铜于水中，稀释至500.0ml。B.碱性酒石酸盐溶液溶173克酒石酸钾钠，50克氢氧化钠溶于水中，稀释至500.0ml。4标定：取10.00ml斐林溶液的A液，加4ml30%醋酸溶液和3g碘化钾，加25ml煮沸后冷却的水，使碘化钾溶解，以0.1N33

5、硫代硫酸钠标准溶液滴定溶液呈微黄色，加硫氰酸铵2g，0.5%淀粉溶液3ml，搅拌后，继续滴定至蓝色消失。斐林溶液的校正系数f计算如下：式中：V——0.1N硫代硫酸钠标准溶液的用量（ml）0.006355——每毫升0.1N硫代硫酸钠溶液相当的铜的克数0.01748——每毫升斐林溶液的A液中含有的铜的克数（6）次甲基蓝指示液，1%1g次甲基蓝溶于100ml水中。5操作步骤（1）取糖化试验的麦芽汁，稀释至20倍或更合适的倍数，使其滴定量在15～50ml之间。（2）预备实验取斐林溶液A、B各5.0ml，置锥形

6、瓶中，加10ml水稀释，加热使其于5min内沸腾，在沸腾状态下用滴定管滴入稀释麦芽汁至蓝色即将消失时，加1～2滴次甲基蓝指示液，继续滴定至蓝色消失，记录所用稀释麦芽汁的数量。（3）正式测定在200ml锥形瓶中加入斐林溶液A、B各5.0ml，再加少于预备实验所用1ml的麦芽汁，加热至沸后，加1～2滴次甲基蓝指示液，用稀释麦芽汁滴至终点，记录用去稀释麦芽汁的总量。6计算根据稀释麦芽汁在正式测定中的用量，查表得相应麦芽糖量，再用下式计算：查表得100ml麦芽汁中麦芽糖毫克数1000总还原糖（麦芽糖，g/ml

7、麦汁）＝f×n或f×查表得100ml麦芽汁中麦芽糖毫克数×n1000×G×D总还原糖（麦芽糖，g/100g浸出物）＝式中：f——斐林溶液系数n——稀释倍数G——麦芽汁中浸出物含量（%）D——麦芽汁20℃比重注意事项：（1）本测定的操作条件必须严格控制，加热时间、滴定速度每次测定都必须一致，由沸腾至滴定完毕必须在3min内结束，否则应重做。（2）用硫代硫酸钠标准溶液标定斐林溶液，标准溶液的浓度应正好0.1000N，否则计算时应把用量换算成相当于0.1000N的用量。33实验二α-氨基氮的测定（茚三酮法）

8、1、实验试剂a显色剂100克磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O）60克磷酸二氢钾（KH2PO4）5.00克水合茚三酮3.00克果糖用水溶液溶解后稀释至1升（此溶液在低温下用棕色瓶可保存2周，pH应为6.6-6.8。操作时可以按比例配成100ml）。b稀释溶液：2克碘酸钾溶于600ml水中，再加入96%乙醇400ml.c标准溶液：溶107.2mg甘氨酸于100ml水中，0℃贮藏。用时按要求稀释。该溶液含有200mgα-氨基氮/升。2、实验操作取糖化的麦