去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的检测方法（征求意见稿）

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1、附件5：化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的检测方法（征求意见稿）1适用范围本方法规定了化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的高效液相色谱/荧光检测器的定量测定方法和液相色谱/串联质谱的定性确证方法。本方法适用于膏霜类、凝胶类和水剂类化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的测定。本方法中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的检出限为0.02mg/L，定量下限为0.05mg/L；取1g样品时的检出浓度为0.2mg/g，最低定量浓度为0.5mg/g。2方法提要化妆品试样经盐酸水溶液提取，正己烷除脂，低温高速离心后，采用

2、高效液相色谱/荧光检测器定量测定，外标法定量，液相色谱/串联质谱仪定性确证。3试剂除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为分析实验室用一级水。3.1乙腈，色谱纯。3.2甲酸，色谱纯。3.3正己烷。3.4磷酸。3.5盐酸。3.6磷酸二氢钾。3.7氯化钠。3.80.1mol/L盐酸水溶液。3.9饱和氯化钠水溶液。343.100.05mol/L磷酸盐缓冲液：称取6.8g磷酸二氢钾（3.6），加900mL水完全溶解后，用磷酸（3.4）调节pH至3.0，用水定容至1L，过滤后备用。3.11标准溶液3.11.1肾上腺素（Epinephrine，C9H1

3、3NO3，CAS：51-43-4），去甲肾上腺素（Norepinephrine，C8H11NO3，CAS：51-41-2），异丙肾上腺素（Isoproterenol，C11H17NO3，CAS：7683-59-2），纯度大于98.0%。3.11.2标准储备溶液（r＝1000mg/L）：称取肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素0.05g（精确到0.0001g）于小烧杯中，分别用0.1mol/L盐酸水溶液（3.8）超声溶解后转移至50mL容量瓶中，0.1mol/L盐酸水溶液（3.8）定容至刻度，配制成浓度为1000mg/L的标准储备液，4℃冰

4、箱保存。3.11.3混合标准储备溶液（r＝10mg/L）：分别量取1.00mL肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素标准储备溶液（3.11.2）至100mL容量瓶中，用0.1mol/L盐酸水溶液（3.8）定容，配制成10mg/L的混合标准储备溶液，4℃冰箱保存。3.11.4系列浓度标准工作溶液：用0.1mol/L盐酸水溶液（3.8）稀释混合标准储备溶液，精密配制质量浓度为0.05mg/L、0.10mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L的系列浓度标准工作溶液。4仪器和设备4.1高效液

5、相色谱仪，配荧光检测器。4.2液相色谱/串联质谱仪，配电喷雾离子源（ESI）。4.3分析天平，感量0.001g、0.0001g。4.4离心机，转速不低于12000r/min。4.5超声波清洗器。4.6涡旋混合器。4.7pH计，测量精度±0.02。5测定步骤5.1试样的制备称取化妆品试样1g（精确至0.001g）于25mL具塞比色管中，加入饱和氯化钠水溶液（3.9）2mL，涡旋1min后加入0.1mol/L盐酸水溶液（3.8）定容至10.034mL，剧烈振荡，涡旋1min，加入正己烷（3.3）4mL，涡旋1min，超声10min，转移至离心

6、管中，12000r/min4℃离心10min，取水层经0.45mm微孔滤膜过滤，滤液作为待测液备用。5.2测定5.2.1液相色谱参考条件色谱柱：SCX柱，250mm×4.6mm（i.d.），5mm，或性能相当者；流动相：乙腈+0.05mol/L磷酸盐缓冲液（3.10）=（5+95）；流速：1.0mL/min；进样量：50mL；荧光检测器激发波长：280nm，发射波长：321nm。5.2.2标准工作曲线的制备在设定色谱条件下，分别取系列浓度标准工作溶液（3.11.4），按浓度从低到高依次经高效液相色谱仪测定，荧光检测器检测，以标准工作溶液浓

7、度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。5.2.3色谱分析采用外标标准曲线法定量测定。使用试样（5.1）分别进样，以保留时间定性，获得目标峰面积。根据标准工作曲线计算被测试样中的含量，待测物的响应值均应在线性范围内。采用液相色谱/串联质谱法对阳性样品进行确认。5.3阳性结果确证测定过程中若有阳性结果，可采用液相色谱/串联质谱法进一步确证。5.3.1液相色谱参考条件色谱柱：C18色谱柱，150mm×2.1mm（i.d.），3.5mm，或性能相当者；流动相：乙腈+0.1%甲酸水溶液=（2+98）；流速：0.2mL/min；进样量：20m

8、L。5.3.2质谱参考条件离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：正离子扫描；监测方式：多反应监测（MRM）；干燥气：氮气，温度350℃，流速10L/min；雾化器：氮气，压力40psi；3