论文：小檗碱、黄连生物总碱对ache抑制作用特征研究

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1、小檗碱、黄连生物总碱对AChE抑制作用特征研究李渊李昊坤宋一骁刘强丁兵兵丁虹*通讯作者：丁虹，女，1964，博士，教授，博导。主要研究方向：药理毒理学。Email:dinghong2000@263.net（武汉大学药学院武汉430072）[摘要]：目的：AchE抑制剂的筛选与探究；方法：通过薄层分析法展开样品，利用显色反应判断各样品对AchE的抑制作用；通过紫外法测定AchE酶解产物在单位时间的生成量判断各样品对AchE抑制作用的强弱；结果：小檗碱高剂量及黄连生物碱对AchE的抑制率很高，且黄连生物碱的抑制率接近100%；结论：小檗碱高剂量及黄连生物碱对AchE有

2、较强的抑制作用。[关键词]：AchE抑制剂小檗碱黄连生物碱薄层分析法紫外法抑制率ResearchintoBerberine,andberberinealkaloidsonthecharacteristicsofAChEinhibition"LiYuanSongyiXiaoLiuQiangDingBingbingLiHaokunDINGHong*(CollegeofPharmacy,WuhanUniversity,Wuhan430072)[Abstract]:Objective:AchEinhibitorscreeningandexploration;Methods

3、:Expandthinlayerchromatographysamples,usingthesamplestodeterminethecolorreactionofAchEinhibition;byAchEenzymedeterminationinthegenerationoftheproductinunittimethesamplestodeterminetheamountofthestrengthofAchEinhibition;results:high-doseberberineandberberinealkaloidsonthehighrateofAchE

4、inhibition,andinhibitionofberberinealkaloidscloseto100%;Conclusion:Thehigh-doseberberineandberberinealkaloidshaveastronginhibitoryeffectonAchE.[Keywords]:AchEinhibitor,thinlayerchromatographyofberberinealkaloidsberberineinhibitionbyUVmethod据统计：美国AD患者为200-400万，全球1700-2500万，我国有关调查尚缺乏大系列

5、、据最新城市普查结果，AD患病率高于血管性痴呆。在西方国家AD是继心脏病、肿瘤和中风之后，排在第四位的导致死亡的疾病。与AD相关的递质改变有乙酰胆碱系统、单胺系统、氨基酸类和神经肽递质，其中胆碱乙酰转移酶和乙酰胆碱类递质的减少是AD的重要原因。临床上主要适用胆碱酯酶抑制药治疗AD.黄连是一味具有广泛药效作用的中药,在国内外用于多种疾病的治疗,且新的药效又不断被发现。而黄连的有效成分为小檗碱，有文献报道小檗碱既有直接拮抗胆碱受体的作用,同时也可能通过抑制胆碱酯酶活性发挥其拟胆碱样作用。因此小檗碱有可能成为治疗AD的有效药物。利用通过紫外法测定AchE酶解产物在单位时

6、间的生成量判断小檗碱对AchE抑制作用的强弱，结果发现小檗碱高剂量及黄连生物碱对AchE的抑制率很高，且黄连生物碱的抑制率接近100%；所以小檗碱高剂量及黄连生物碱对AchE有较强的抑制作用，有可能成为新的治疗AD的药物。1材料与方法紫外法观察受试样品对AChE抑制作用1.1材料1.1.1仪器与设备：移液器（200、1000μl）EP（1、10ml）、量筒（10ml）。储液瓶、玻璃棒、50ml、100ml容量瓶、棕色储液缸（容量约100ml）、10mL、1.5mLEP管若干、微量石英比色皿、紫外分光光度计、恒温水浴锅、洗瓶、擦镜纸若干、500ml量筒、pH试纸、玻

7、璃棒、废液缸、分析天平、称量纸若干、药匙1.1.2原料与试剂：缓冲溶液A：pH8.0的Tris-HCl（50mM）、缓冲溶液B：150mL含BSA0.1%的溶液、缓冲溶液C、ATCI底物溶液、DTNB溶液、加兰他敏（用DMSO稀释成0.01mg/ml的溶液）、小檗碱（40μg/ml、20μg/ml、10μg/ml、5μg/ml）、黄连生物总碱（20μg/ml、40μg/ml）酶（将纯酶用缓冲溶液B配制成浓度3IU/ml10ml，临用时配制）1.2方法1.2.1在1.5mlEP管中依次加：样品→BufferB→DNTB→ACTI→（混匀）→AChE酶（具体加入试剂顺

8、序和用量见