实时荧光定量RT - PCR 法检测膀胱移行细胞癌VEGF的表达和意义.doc

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1、实时荧光定量RT-PCR法检测膀胱移行细胞癌VEGF的表达和意义作者：安全意，张金刚，刘德斌，李成，马可为，姜丽萍【摘要】目的建立实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应（real-timequantitative,RT-PCR）检测膀胱移行细胞癌（BTCC）组织VEGFmRNA表达的方法,并验证其与免疫组织化学检测VEGF蛋白表达的相关性。方法采用免疫组织化学SP法和实时荧光定量RT-PCR法分别从蛋白水平和mRNA水平检测了31例BTCC和15例正常膀胱黏膜组织中VEGF的表达。结果BTCC中VEGFmRNA表达水平显著高于正常组，两组比较差异有显著

2、性（P<0.05）;BTCC中表达水平在高分化组与中低分化组之间、Tis-T1期与T2-T4期间的差异均有显著性（P<0.05）。VEGF的阳性表达率在BTCC组中为100%,显著高于正常组（P<0.05），在高分化组与中低分化组之间、Tis-T1期与T2-T4期间的差异均有显著性（P<0.05）。结论本研究所建立的用于检测人BTCC组织VEGFmRNA表达的实时荧光定量RT-PCR方法,是一种快速有效、灵敏度高、特异性好的定量检测方法,与免疫组化SP方法检测的VEGF蛋白表达具有良好相关性，可作为研究膀胱肿瘤的生物学行为

3、和判断预后的参考指标。【关键词】膀胱癌;血管内皮生长因子;免疫组织化学；实时荧光定量RT-PCR【Abstract】ObjectiveToestablishareal-timefluorescencequantitativeRT-PCRfordetectionofVEGFmRNAexpressioninbladdertransitionalcellcarcinoma（BTCC）andverifythecorrelationwithproteinexpressiondetectedbytheimmunohisochemistrymethod.Met

4、hodsTotalRNAwasextractedwithTrizolfromthetissuesandmRNAwastranscribedreverselyintocDNA.Thereal-timequan-titativeRT-PCRwasusedtodetecttheexpressionofVEGFmRNAin31inBTCCand15controlnormalbladdermucosatissues.TheimmunohistochemistrySPmethodwasusedtoevaluatetheproteinexpressionofV

5、EGF.ResultsTheexpressionofVEGFmRNAwassignificantlyhigherinBTCCtissuesthanthatinthenormalbladdermucosatissuetissues（P<0.05）.BTCCexpressionlevelsinwell-differentiatedgroupandbetweengroupsofpoorlydifferentiated,Tis-T1withT2-T4perioddifferenceswerestatisticallysignificant（P<

6、;0.05）.ConclusionReal-timefluorescencequantitativeRT-PCRusedtodetecttheexpressionofVEGFmRNAmightbeareliablemethodforearlydiagnosisofBTCC.TheexpressionofVEGFmRNAiscorrelatedwiththatoftheVEGFproteinsignificantly.Itcanbeusedtostudythebiologicalbehaviorofbladdercancerandjudgthepr

7、ognosis.【Keywords】bladdercancer;vascularendothelialgrowthfactor;immunohistochemistry;real-timefluorescencequantitativeRT-PCR5膀胱肿瘤是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，其中膀胱移行细胞癌（bladdertransi-tionalcellcarcinoma,BTCC）占90%以上,且复发率极高，复发后肿瘤恶性度可增高、浸润、转移等行为有增强趋势。此过程与肿瘤细胞外基质的降解、新生血管的大量形成有密切关系。血管内皮生长因子（vascu

8、larendothelialgrowthfactor，VEGF）是血管内皮细胞的特异性有丝分裂原，能促使肿瘤的血管生成、血管内物质外渗、