hplc法测定不同产地蜂胶中槲皮素的含量

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1、万方数据第32卷第3期2009年6月云南中医学院学报JournalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicineV01.32No.36,2009HPLC法测定不同产地蜂胶中槲皮素的含量·王小平‘,林励’△,白吉庆1(I.陕西中医学院.陕西成阳712046;2.广州中医药大学中药学院.广东广州510405)摘要:目的:测定国内不同产地蜂胶中槲皮索n,J含量.力法:噪用HPLC法.I)iamonsil(钻石)C18(46ramX250mm,5trm)色谱柱,甲醇

2、一0.4%的磷酸水为流动相,梯度洗脱.流速为I.0mlJmin.检测波长为283nm。结果:槲皮素的含量,河南最高,为27.800mg·g~,其次是山东和甘肃。分别为26.150mg·g-’,14.065mg-g一,内蒙古最低为10.754mg·g~。结论:不同产地蜂胶中槲皮索的含量有一定差异。关键词:蜂胶;槲皮素;产地;HPLC中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1000---2723(2009)03---0030--03蜂胶(propolis)是蜜蜂从植物芽苞和树干处采集的树胶,混入蜜蜂

3、上颚腺分泌物和蜂蜡等形成的一种具有芳香味的胶状固形物,其主要化学成分为黄酮类、萜烯类、酚酸类化合物等多种生物活性物质⋯。现代药理研究表明:蜂胶中的黄酮类提取物可增加骨密度,减少去卵巢大鼠骨钙丢失,预防骨质疏松【21;蜂胶总黄酮对大鼠心肌缺血一再灌注损伤诱导细胞凋亡具有改善作用t3];此外,蜂胶中黄酮类物质还具有抗病毒、抗菌消炎、抗肿瘤、抗氧化、降血脂、调节机体免疫功能等多种生物活性作用【4j,在药品、保健品及化妆品等方面具有广阔的应用前景。作者对4个产地蜂胶中总黄酮的含量进行测定,发现其总黄酮的含量相差

4、较大。由于蜂胶中化学成分的种类与产地周围的植被分布有关,不同产地蜂胶中黄酮类成分不尽相同。槲皮素是不同产地蜂胶中均含有的黄酮类成分之一,且含量较高。而槲皮素的含量已成为判定蜂胶产品质量的标志性物质之一,为考察不同产地蜂胶的质量,进行了本项研究。1仪器、试药与材料1.1仪器与材料德国DionexP680A型高效液相色谱仪(PDA一100检测器、STH585柱温箱、P680C泵、ASI一100自动进样器),chromeleon色谱工作站;8953Dietikon型电子分析天平(瑞士,精度0.1ing);AS

5、2060B型超声仪(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。1.2试药槲皮素对照品(081—9003)由中国药品生物制品鉴定所提供;流动相所用甲醇为色谱纯;其他试剂:甲醇、磷酸等均为分析纯;蜂胶(毛胶,由广州市宝生圆有限公司提供,经广州市蜂产品研究所卢占列鉴定为蜂胶)。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:迪马公司Diamonsil(钻石)C18色谱柱(46mm×250ram,51xm);流动相:甲醇一0.4%的磷酸水,梯度洗脱(甲醇:Omin为35%,10min为35%,20rain为45%,30min为45%,6

6、0min为50%),流速:1.OmL/min。检测波长:283nm,柱温:25℃;进样量:lOIxL。‘2.2溶液的制备2.2i1对照品溶液..精密称取干燥至恒重的对照品槲皮素适量,加甲醇使溶解,制成每毫升含槲皮素0.1096mg。2.2.2蜂胶供试品溶液·基金项目:广州市科技计划项目(2005Z—E0101)收稿日期:2008卅J---06修回日期:2009—04-28作者简介:壬小平(1976~),女,陕西宝鸡人,讲师。博士,从事中草药化学成分分析及新药研究。△通讯作者:林励,Tel:020—365

7、85270。万方数据第3期王小平,等:HPLC法测定不同产地蜂胶巾槲皮素的含量将蜂胶在一lO℃冷冻数天后用粉碎机粉碎,取蜂胶样品约lg(精密称定),置于索氏提取器中,加100mL丙酮,加热回流至提取液无色,提取液回收溶荆至干,残渣用甲醇溶解并转移至100mL量瓶中。加甲醇至刻度,摇匀,精密吸取各样品的甲醇液适量,置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。‘2.3线性关系考察精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10mL,分别置于10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,取10uL注入液相色谱仪,按2.1项下

8、的色谱条件进行测定,记录峰面积,。以峰面积对浓度线性回归,在0.02192—0.1096mg/mL范围内呈良好的线性关系,回归方程Y=249.78X一0.7425,R2=0.9999。,2.4方法学考察2.4.1精密度试验取同一供试品溶液(河南产)10p。L,连续进样5次,测定槲皮素的峰面积值,其RSD为0.44%.表明仪器精密度良好。2.4.2稳定性试验取同一供试品溶液(河南产)10“L,分别在0h、4h、8h、12h、24h、48h注入

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