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1、华中科技大学硕士学位论文茯苓多糖的提取及生物活性研究姓名：刘迎鸣申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：何光源;陈明洁20080527华中科技大学硕士学位论文摘要真菌多糖具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎症、降血糖、降胆固醇、降血脂等多种生物活性，他们通过免疫调节作用抑制肿瘤或癌细胞的生长，并且对正常细胞无毒副作用。茯苓作为传统中药，其在提高免疫力、抗肿瘤、镇静、利尿消肿等多个方面扮演重要的角色，越来越被研究者所重视。茯苓含有多种成份主要有茯苓多糖、木聚糖、酸性多糖、甘露聚糖、茯苓酸等，其中茯苓多糖的成份最
2、高。揭示茯苓多糖的性质是研究茯苓的重点。本论文从提取、纯化、生物活性等方面对茯苓多糖进行了探索。我们得到以下结论：（1）初步确定了超声波提取茯苓多糖的效果，超声波有助于茯苓多糖的提取；通过多级分离体系得到了生理盐水提取的多糖PC1、热水提取的多糖PC2、碱提取的多糖PC3-I和PC3-II，通过对分级提取的多糖的光谱扫描分析，其蛋白含量比较低，多糖的纯度高。去除茯苓多糖中的蛋白杂质以“酶－sevage”法为最为理想，“sevage”法反复提取7次和终溶度为15％TCA反复提取三次后都对PC2的蛋白去除有一定的效
3、果，sevage反复提取7次后对PC3-I的蛋白去除有一定的效果，TCA法并不适用于PC3-I的蛋白去除。（2）从初步的实验结果中并未观察到茯苓多糖有明显的抗菌作用。（3）通过MTT法筛选，发现PC3-I对HepG2和乳腺癌细胞（MDA-MB-231）都有抑制作用，IC50分别达到了74.1ug/ml、152.4ug/ml。PC2对于乳腺癌细胞有抑制作用，IC50为897.4ug/ml。PC3-I对HepG2的抑制在加药后的6个小时作用效果明显。通过粘度法初步测算具有抑癌活性的PC3-I平均分子量范围4在1×1
4、0左右。通过透析分离获得的PC3-I不同组分对HepG2和乳腺癌的抑制存在差别。我们推测茯对于不同的癌细胞，茯苓多糖的抑制作用存在差别，其具体的作用机制也可能有所不同。综上，本文探索了茯苓多糖的提取、去蛋白纯化、抑菌作用以及抗肿瘤作用，进一步的加强了人们对茯苓多糖的认识和了解。其中茯苓多糖在抗肿瘤方面的作用和差异是一个重要的信息，值得我们进一步的探索和研究。关键词：茯苓多糖提，取分离，纯化，生物活性I华中科技大学硕士学位论文AbstractFungalpolysaccharideshavebeenfoundto
5、exhibitmanybioactivities,suchasantiviral,anti-flammation,hypoglycemic,hypocholesterolemic,andhypotensive.theyaregoodimmunomodulatorstoinhibitcancercellsgrowthwithoutanydamagetonormalcells.PoriacocosisatraditionalChinesemedicine,andplayanimportantroleinimprov
6、ingimmunity,anti-tumor,sedation,diuresis,anddetumescence,whichobtainedmoreandmoreattentionbyresearchers.Poriacocosecontainsavarietyofingredients,mainlyareporiapolysaccharides,xylan,acidpolysaccharide,mannan,andporiaacid,whichthehighestconstituentisporiapolys
7、accharides.Wedidresearchworkfromextraction,purification,biologicalactivity,andtootheraspectsofPoriacocos.Theresultsobtainedfromtheseexperimentsareasfollows.(1)Ultrasoundinextractingporiapolysaccharideiseffective.Wehavesetupamulti-levelsystemtoisolateporiapol
8、ysaccharidesfromPoriacocos.FormthissystemweobtainedPC1,PC2,PC3-I,PC3-IIfourdifferentporiapolysaccharides.Throughspectralscanningofthosepolysaccharides,theirproteincontentwasrelativelylow,andpoly
