血清总蛋白测定

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1、郧县中医院检验科生化室作业指导书文件编号：检验科-SH-01版本/修订号：1/0主题内容血清总蛋白测定生效日期：2011-5-20第1页共103页血清总蛋白测定(双缩脲法)1.实验原理：凡分子中含有两个甲酰氨基(-CONH2-)的化合物都能与碱性铜溶液作用，形成紫色复合物，这一反应称双缩脲反应。蛋白质分子中有许多肽键(-CONH-），都能起此反应，而且各种血浆蛋白显色程度基本相同.紫色复合物在540nm有吸收峰，并与蛋白含量成正比，通过与同样处理的标准蛋白比较可求出血清总蛋白含量。因此，在严格控制条

2、件下，双缩脲反应可作为血浆蛋白总量测定的理想方法，从测定的吸光度值计算出蛋白质含量。吸光度的大小与试剂的组分、pH值、反应温度有关。蛋白质+铜离子NaOH紫红色络合物2.标本采集及存放：无特殊要求，最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。离心后采集血清或肝素抗凝的血浆。血清标本20～25℃保存可稳定6天；4～8℃保存可稳定4周；-20℃保存至少可稳定1年。3.实验试剂及仪器：3.1试剂：使用北京利德曼总蛋白试剂盒。试剂组成如下成份含量酒石酸钾钠32mmol/L硫酸铜12mmol/L碘化钾30mmol/L

3、NaoH600mmol/L3.2仪器及参数：3.2.1使用凯美雅生化分析仪，具体的操作详见生化分析仪作业指导书.3.2.2分析参数：主波长540nm分析方法终点法副波长700nm反应方向向上反应温度37℃S:R5：3004.质量控制：在测定每一批标本前先做正常值和异常值来两个水平的质控品，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控（质控规则见生化室室内质控操作规程）。在控后方可进行标本测定，若失控，查明原因并采取措施。5.计算方法：样本总蛋白含量＝×C0△At----------标本

4、管的吸光度变化；△As----------标准管的吸光度变化；C0-----------标准液的浓度；6.参考值范围：健康成人走动后血清总蛋白浓度为64～83g/L，健康成人静卧时，血清总蛋白浓度为60～78g/L。7.临床意义:血清总蛋白有生理性波动，直立体位由于体液分布的原因，血液相对浓缩，而长久卧床者血液较直立体位相对稀释。因此长久卧床者血清总蛋白比直立活动时约低3～5g/L；新生儿血清总蛋白可比成人低5～8g/L；60岁以上老人约比成人低2g/L。（1）总蛋白浓度增高：①血清中水分减少，使总

5、蛋白浓度相对增高。凡体内水分的排出大于水分的摄入时，均可引起血浆浓缩，尤其是急性失水时(如岖吐、腹泻、高热等)变化更为显著，血清总蛋白浓度有时可达100～150g/L，又如休克时，由于毛细血管通透性的变化，血浆也可发生浓缩。慢性肾上腺皮质功能减退患者，由于钠的丢失而致继发性水分丢失，血浆也可出现浓缩现象。②血清蛋白质合成增加。大多发生在多发性骨髓瘤患者，此时主要是球蛋白的增加，其量可超过50g/L，总蛋白则可超过100g/L。（2）血清总蛋白浓度降低：①血浆中水分增加，血浆被稀释。如因各种原因引起的

6、水钠潴留。②营养不良和消耗增加。长期食物中蛋白含量不足或慢性肠道疾病所引起的吸收不良.使体内缺乏合成蛋白质的原料，或因长期患消耗性疾病，如严重结核病、甲状腺功能亢进和恶性肿瘤等，均可造成血清总蛋白浓度降低。③合成障碍，主要是肝功能障碍。肝脏功能严重损害时，蛋白质的合成减少，以白蛋白的下降最为显著。④蛋白质丢失。严重烫伤时，大量血浆渗出，或大出血时，大量血液的丢失;肾病综合征时，尿液中长期丢失蛋白质;溃疡性结肠炎可从粪便中长期丢失一定量的蛋白质.这些均可使血清总蛋白浓度降低。8.附注：⑴干扰因素：①胆

7、红素≤40mg/dl，血红蛋白≤200mg/dl,抗坏血酸≤50mg/dl,乳糜1.6%时对检测结果没有影响。②酚酞、溴磺酞钠在碱性溶液中呈色，影响双缩脲的测定结果，右旋糖酐可使测定管混浊亦影响结果，理论上这些干扰均可吸光度太高，可影响测定的准确性。⑵方法局限性：本试剂线性上限为100g/L，如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。⑶危急值报告：无危急值。⑷注意事项:①血清蛋白质的含量一般用g/L表示，因为各种蛋白质的分子量不同，不能用mmol/L表示

8、。②脂类高的血清,呈色后混浊不清,可用乙醚抽提后再比色。③当采用50g/L的浓度标准液时，吸光度的变化范围在0.10～0.35。9参考文献：9.1叶应妩、王毓三、申子瑜等.全国临床检验操作规程【第三版】东南大学出版社，20069.2梁淑新、施俊英.临床检验操作技术系列丛书生物化学检验分册，军事医学出版社，2006郧县中医院检验科生化室作业指导书文件编号：检验科-SH-02版本/修订号：1/0主题内容血清白蛋白测定生效日期：2011-5-20第5页共103页血清白蛋白测