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1、高效液相色谱法测定肌酐清除率 1材料与方法 1.1仪器和试剂 1.1.1仪器 高效液相色谱仪(包括CR4A数据处理机、SPD6AV检测器、LC9A送液泵、DGU4A脱气机、CTO6A柱箱、SCL6B控制器和SIC6B自动进样器)为日本岛津制作所产品。CIBACORNINGEXPRESSPLUS自动生化分析仪为美国康仁公司产品。 1.1.2试剂 肌酐(Cr)标准品为美国Sigma公司产品，Cr测定试剂盒(Jaffe法)为意大利Sclavo公司产品，其他为国产分析纯试剂。
2、1.2标准品和样品的制备与前处理 1.2.1标准品 将Cr用重蒸馏水配成浓度为274.6μmol/L的标准液S1,再倍比稀释为S2、S3…S6。准确吸取上述标准液各100μl,分别滴加1.9ml甲醇,漩涡振荡器上混匀,于6000r/min离心10min,取上清液1.6ml于干净试管中，在氮气流下吹干，分析前以流动相300μl复溶,漩混1min,自动进样45μl进行色谱分析。 1.2.2样品(正常对照30例及本院患者23例) 取血清或40倍稀释的24h混合尿样100μl,分别滴加1.9ml甲醇
3、后的处理同标准品。 1.3色谱分析条件 分析柱:ShimpackCLCODS15cm×0.6cm;预柱:ShimpackCLCGODS(4);流动相为0.02mol/LKH2PO4,用磷酸调至pH3.2;流速为1ml/min;柱温35℃;AUFS0.001;波长开始设为233nm，色谱分析至5.4min时自动变换为263nm,至10min时分析结束,重新设为233nm,12min时开始下一试样分析。定量分析前对该条件下的色谱峰进行了充分的定性分析［3］。 1.4Jaffe法 采用动力
4、学法:波长510nm,时间60s,样品体积27μl，试剂体积270μl。 1.5系列标准液和样品加甲醇处理前 用自动生化分析仪测得Jaffe法结果（0）,处理后先测得HPLC结果(血清和尿液同时测定者计算CCr),然后再测得处理后(Pre)的血清和尿样的Jaffe法结果［1］。 2结果 2.1HPLC法和Jaffe法的工作曲线的线性回归方程 分别是Y(浓度)=0.43+0.017X(峰高)和Y(浓度)=-3.11+4417.6X(吸光度差);相关系数分别是0.9999和0.9998。
5、3.1从工作曲线的回归方程可知 Cr浓度在8.6μmol/L～274.6μmol/L范围内,HPLC法的峰高(H)和Jaffe法的吸光度差(ABS)都与Cr浓度成显著的直线关系。 3.2两法测定的血清和尿样以及处理后的血清和尿样结果 均显著相关(r=0.889～0.997);血清处理前后HPLC法和Jaffe法结果线性回归方程斜率均与1差异有显著性(P<0.01);而其他与1差异无显著性(P>0.05);HPLC法和Jaffe法结果线性回归方程截矩除未处理试样的CCr与0差异有显著
6、性(P<0.01)外,而其他与0差异无显著性(P>0.05)。两法结果经配对t检验显示除处理后尿样差异无显著性外(P>0.05),血清和尿样以及处理后的血清两法测定结果差异均有显著性(P<0.01),SCrHPLC法测定结果明显较Jaffe法高,与文献报道［4，5］的结果一致。总而言之血清中除蛋白质的基质效应可使Jaffe法的测定结果偏低外,还有其他影响因素;而尿样中这种影响作用很小，因而HPLC法CCr结果明显较Jaffe法低;两法结果在试样去除蛋白后较未去除蛋白前更接近。
7、 3.3两法测定Cr值比较 我们实测HPLC法得到的肌酐清除率(CCrHPLC)平均相当于Jaffe法(试样不预处理)得到的肌酐清除率(CCrJaffe)的87%。这主要是由于血清中Jaffe法测定的Cr比HPLC法所测Cr值偏低，而在尿液中这种偏低的程度更为显著,因此临床评价肾功能时应注意方法的差异。【参考文献】 ［1］何书泉,韩跃武,朱昕,等.高效液相色谱法同时测定肿瘤患者尿中假尿苷和肌酐的含量［J］.色谱,1995,13(4):288289. ［2］江丽,梁统,凌光鑫,等.恶性肿
8、瘤患者血清和尿中假尿苷检测的意义［J］.中国实验诊断学,1997,1(3):1921. ［3］彭长华,李承彬,王昌富,等.用紫外可见光检测器进行色谱峰的光谱分析方法［J］.色谱,1997,15(4):322323. ［4］杨林,徐家明,马玉楠.Jaffe氏法测定血清(浆)肌酐应注意的一个问题［J］.中华医学检验杂志,1989,12(1):14. ［5］ThienpontLM,VanLanduytKG,StocklD,etal.Candidaterefer
