冰冻切片制作方法改进探讨.doc

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1、冰冻切片制作方法改进探讨【摘要】目的：探讨制片效果比较理想的冰冻切片制作方法，以提高冰冻切片的质量。方法：择取新鲜活体组织，取材后直接冻结，经恒温式冰冻切片机切片，冰冻固定液固定，HE染色。剩余组织做石蜡切片对照。结果：质量较好，染色鲜艳，镜下组织结构细胞形态清晰，细胞核浆对比分明。结论：此方法简便快速，制片质量满意，可提高病理诊断的准确性。【关键词】冰冻切片；制作；冰晶　　冰冻切片的方法是一种最省时最快速的制片方法，因此主要用于临床手术中的病理诊断。其原理是：冷冻使组织变硬以代替石蜡做浸蜡。将组织固定在标本托上短时间内冻好进行切

2、片。术中确诊病变性质，决定手术范围，因此做出高质量的冷冻切片至关重要。这就要求每个病理技术人员不仅要有高度的责任心，还要有熟练的技术，在最短时间内制出高质量的切片。我科在工作中，经过反复试验和不断改进，摸索出一种制片效果比较理想的冰冻切片制作法，在术中病理诊断取得满意的效果，现介绍如下。　　　　1材料与方法　　1.1材料　　2006年我科完成的冰冻切片140例其中涉及到的组织标本有乳腺70例，卵巢55例，甲状腺15例。采用德国莱卡恒温式冷冻切片机。　　1.2方法　　择取新鲜活体组织取材后直接冻结、切片、即投入固定液（配制方法：40

3、%福尔马林15mL，95%乙醇80mL，冰乙酸5mL）中，固定1min～2min，入苏木素染核1min～2min，水洗后，1%盐酸乙醇分化数秒，水洗后，0.1%氨水返蓝，水洗后，入1%水溶性伊红10s左右，水洗，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封固。　　2结果　　使用该方法所制冰冻切片速度明显提高，切片质量较好，染色鲜艳，镜下组织结构，细胞形态清晰，细胞核，细胞浆色彩鲜艳对比分明，术后诊断符合率达96%以上。　　3讨论3　　病理技术是病理学诊断不可分割的一部分，制片质量的好坏很大程度上影响病理医生做出正确的病理诊断。因此，保证和提高

4、制片质量是每个病理技术员的责任。为了保证制片质量，减少差错，防范责任事故，避免医疗纠纷，有必要加强对病理技术进行科学规范管理和制片的控制。在冰冻切片方面我科主要从以下环节上加强质控。　　3.1组织取材大小　　组织块大小适宜，理想取材大小为1.5cm×1.5cm，厚2mm。组织过大，切片时阻力过大，易产生皱折，刀痕，组织易崩碎，增加制片难度，影响诊断。如需在同一标本托上放大小两块组织时，应尽量冻成一个平面，与刀锋平齐，以防切片不完整，发生漏诊。若送检组织过小，请预先速冻一冷台面，再行包埋，利于制片。　　3.2冷冻时间　　速冻时间过长

5、，切片呈碎屑或条痕状，其处理方法是：切出完整平面后用戴乳胶手套的拇指按压回温，直到切片完整为止，反之，时间过短，切片呈粥糜状或切不下来，则需继续冷冻。　　3.3切片　　切片时用力均匀，厚度约4μm～5μm，特殊要求时可达3μm，切好的组织在干净的玻片上粘附时可顺着一个方向稍微用力轻轻一带，可避免组织摊片过程中皱折，切好后立即放入提前配制好的冰冻切片固定液中及时固定1min～2min［１］。　　3.4染色　　切片后做快速HE染色,苏木素染色过程需加热进行,一般1min～2min即可。这样做出来的快速切片镜下观结构完整、平坦、无皱折。

6、细胞核与细胞质染色色泽鲜艳,对比清晰,细胞无肿胀,无收缩,近似常规石蜡切片,封片时注意无气泡及无溢液,切片整洁,标签清楚端正,根据需要可切出半张玻璃片大小,厚薄均匀,一层细胞的组织切片［２］。　　3.5冰晶的形成致使无法及时准确地为临床提供病理诊断依据。我们知道，生物体是由细胞构成的，一般情况下，细胞中水分约占80%～90%，水在各种组织中含量最多，其解决方法为：①在不影响病理诊断的前提下，标本取材尽量小一些，组织厚度勿超过4mm，这样有利于组织的快速冻结，将组织块快速移到冷冻头上骤冷以缩短冷冻时间,减少冰晶现象出现,有效防止冰晶

7、挤压周围组织，改变甚至破坏组织原来的形态结构［３］。②临床科室若术中需要冰冻，应通知病理科，以便提前开机做好准备，这样可避免由于缓慢冷冻所产生的冰晶。因为冷却速度愈快，过冷温度越低，所形成的晶核数量越多，晶体来不及生长就被冻结，从而失去了形成较大冰晶的机会。③需要术中进行快速病理诊断的活检组织，最好用一次性塑料或乳胶手套盛放，切忌用纱布包裹组织，以免纱布上的线毛粘在组织上，不利于制片，且易损伤刀刃。④3临床医师送检标本尽量避开水源不要用生理盐水浸泡或用湿纱布包裹组织，由于液体浸泡后，组织内水分会增加，易造成冷冻后组织内冰晶形成增多

8、。组织送检取材时，如遇含水量高的标本时，应尽量用干纱布吸干水分后再行冷冻，避免由于冰晶形成出现诊断上的失误。　　对于冰冻切片的质量因素主要有以上几点，固然还存在某些其他方面的因素。如果能正确对待以上几方面的问题，冰冻切片的质量方可得到保证，且能制备