化学发光免疫分析方法及其应用

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1、化学发光免疫分析方法及其应用(兰州市第二人民医院甘肃兰州730046)【摘要】化学发光免疫分析方法因其具有灵敏度好、分析速度快、所需的设备简单等一系列优点，在医药、食品、环境检测等领域均有广泛地研究和应用。在实际的工作中，由于经典的化学发光免疫分析法对大量复杂的样品测定所需时间长、成木高、样品用量大等不足，不能满足实际需要。因而，建立快速、高灵敏度、高通量和低成木的检测方法成为化学发光免疫分析方法的研究热点和发展趋势。鉴于此，木文主要对近几年化学发光免疫分析方法的种类以及免疫分析方法的研究应用进行探讨。【关键词】化

2、学发光免疫：分析：方法：应用【中图分类号】R927.1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2016)01-0360-021.化学发光免疫分析方法的种类化学发光免疫分析方法的发光机理是在化学发光反应体系中的反应物、中间体等物质分子，吸收了化学反应释放的能量，由此这些分子从基木状态活跃到激发状态，然后又从激发状态返回到基木状态中，在此过程中会释放能量的光，而免疫分析方法就是对这些光进行测定及定量分析。化学发光免疫分析方法括免疫化学反应和化学发光反应两大部分。免疫化学反应发光分析是把化学发光物质或酶通过化学方

3、法标记在抗原或抗体上,然后抗原与抗体会发生特异性反应，继而形成抗原一抗体免疫复合物。化学发光分析就是上述所说的，使化学发光体从激发状态返回到基木状态，主要在化学免疫反应结朿后，加入氧化剂或酶的发光底物，通过氧化形成处于激发态的中间体，这时发光体会释放能量回到稳定常态。1.1化学发光免疫分析化学发光免疫分析是十分常见的一种化学发光免疫分析方法，具体而言是直接利用化学发光剂对抗体和抗原进行直接标记的方法，常见的化学发光剂主要有两类，分别是鲁米诺和吖啶酯类发光剂。首先介绍吖啶酯类标记剂的化学发光免疫分析。叮啶酯类化学发光

4、剂产生的原因主要是因为热稳定性不佳，最终合成热稳定性较好的吖啶酯类衍生物。吖啶酯类化学发光剂的优点就在于化合物量子的产率相对较高，可以达到0.05,在标记的过程中，并II不需要加入催化剂，发光体系简单且快速，具冇标记效率高、成本低的诸多特点。同时，吖啶酯类化学发光剂，会采用H2O2和NaOH元素作为发光启动试剂，而iL还会加入表面活性剂使其发光增强。对于鲁米诺类化学发光剂，主要进行氧化反应发光。鲁米诺类发光剂适用于碱性溶液的条件，可以使多种諷化剂氧化发光。同时为了增加氧化的速度，通常会添加无机催化剂或相关酶。鲁米诺

5、发光的光子产率是0.01,要低于吖啶酯类化学发光剂，其最大的发射波长为425nm。1.2化学发光酶免疫分析化学发光酶免疫分析的工作原理是用酶标记生物活性物质，在此基础上进行免疫反应。在这个过程中，免疫反应复合物上的酶会对发光底物产生作用,进而在信号试剂的作用下发光，用于测定发光的仪器是发光信号测定仪。在化学发光酶免疫分析中常用的标记酶包括HRP（辣根过氧化物酶）和ALP（和碱性磷酸酶），这两种酶的发光底物是存在较大差别，分别有各自的发光特点及特性。HRP经常使用的发光底物是鲁米诺及其衍生物。在实验过程中，通常标记抗

6、体使用的酶类是过氧化酶，完成免疫反位后，这吋就需要鲁米诺发光底物，然后发光试剂就会发生作用，同吋决定发光强度的就是在酶免疫反应物中的酶的浓度，之后使鲁米诺发光，酶浓度的不同使鲁米诺发光程度也不尽相同。传统的化学发光体系一般只发生几秒的瞬吋间发光，但在发光系统中加入发光剂，就会使发光的吋间延长，可以进行测量和实验。ALP目前广泛应用于两种免疫分析,分别是酶联免疫分析和核酸杂交分析。ALP中的碱性磷酸酶和1,2—二氧环乙烷组成的发光体系是当前最重要且灵敏的化学发光体系，可以使化学分子结构更为稳定，并II产生光亮的时间较

7、长，光亮的强度大。1.3电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析的工作原理为：电化学反应导致的化学发光过程。电化学发光一般在电极的表面进行，经常使用的发光底物是三联毗啶钌，冋吋三丙胺作为激光反应。电化学发光反应具有很大的优势：（1）电化学反应发光吋间长，灵敏度高；（2）电化学反应标记的分子小，可以同时标记多个，并且标记物十分稳定；（3）电化学发光免疫分析的光信号动力学范围较宽，线性好；（4）可以重复测量，进行多元检测；（5）光化学发光免疫完成一个样品分析通常只需十八分钟，具冇快速、高效的特点，同吋可以实现全自动化。电化

8、学发光免疫分析应用较为成熟，主要应用于抗原、半抗原和抗体的免疫检测。1.化学发光免疫分析的建立（1）抗体制备。不论哪一类化学发光免疫分析法均离不开抗体的使用，因此，在化学发光免疫分析法的建立时，首先应制取满足方法的抗体。制备抗体利用的是动物对外来异己物排斥的作用，在血液当中形成针对词异己物的IgG（免疫球蛋白），也就是抗体。对这些体液予以提取则能够得到所需要