蒺藜皂苷对缺氧

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1、蒺藜皂苷对缺氧刘雪梅,黄启福张允岭,娄金丽,柳洪胜,郑宏【关键词】蒺藜;神经元;细胞凋亡;线粒体;缺氧Objective:ToobservetheeffectsofTribulusterrestrisL.saponion(TTLS)onapoptosisincorticalneuronsinducedbyhypoxia-reoxygenationinrats.Methods:Primarycultureofratcorticalneuronsedinvitro.Amodelofapoptosisofcorticalneuronsixtureof95%N2and5%C

2、O2,andthenreoxygenationinneuralcellsixtureof95%O2and5%CO2for12h.DifferentconcentrationsofTTLSinisteredtotraditionalChineseherbalmedicine-treatedgroupseparatelyduringhypoxiaandreoxygenation.Theapoptosisrateetryiodidestaining.Mitochondriamembranepotentialicroscopeeasuredbyfluorescentplat

3、ereader.Baxproteinexpressionmunohistochemicaltechnique.Results:Thepercentageofapoptosisitochondriamembranepotentialembranepotentialinducedbyhypoxiaandreoxygenation,decreasetheactivityofcaspase-3/7,reducetheexpressionofBaxprotein,andinhibittheapoptosisofthecorticalneurons.Conclusion:Hyp

4、oxiaandreoxygenationcaninduceapoptosisofratcorticalneurons.TTLScandecreasetheapoptosisinducedbyhypoxiaandreoxygenation.Themechanismmightberelatedtostabilizationofmitochondriamembranepotential,inhibitionofcaspaseactivityandreductionofBaxproteinexpression.Keyitochondria;anoxia蒺藜皂苷(Tribul

5、usterrestrisL.saponion,TTLS)是从吉林产蒺藜地上全草中提制,主要包括呋甾醇和螺甾醇两类皂苷。大量研究证实TTLS具有增加脑血流量，减轻脑含水量，减少脑梗死面积等作用［1-3］。前期研究证实心脑舒通胶囊(主要成份为TTLS)对大鼠急性多发性脑梗死脑缺血病变有明显的改善作用［4］，并且TTLS可抑制皮层神经元凋亡的发生。本实验在对原代培养的大鼠大脑皮层神经元缺氧缺糖后，进行给氧给糖处理,观察TTLS对皮层神经元凋亡以及线粒体膜电位变化的影响,从凋亡机制上进一步探讨TTLS对缺氧-复氧后大鼠皮层神经元凋亡的影响。1材料和方法1.1主要药品与试剂T

6、TLS冻干粉由吉林省敖东洮南药业股份有限公司提供；高糖达尔伯克改良伊格尔（Dulbecco’smodifiedEagle’smedium,DMEM）培养基、NeurobasalMedium、B27supplement购自Gibco公司；胎牛血清、马血清购自Hyclone公司；胰蛋白酶、多聚赖氨酸（MaxVisionTM试剂盒、浓缩型二氨基联苯胺（diaminobenzidine,DAB）试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。1.2主要仪器CO2培养箱（SHEL-LAB2323）；低温高速多功能离心机（Eppendorf5415D）；荧光酶标仪（BIO-TEKFLx

7、800）；激光扫描共聚焦显微镜（OlympusFV500-IX81）；流式细胞仪（BeckmanCoulterEpicsAltra）。1.3皮层神经元的原代培养MTT结果显示，模型组细胞活性明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，0.003g/L的TTLS对神经细胞活力无改善作用，随着TTLS浓度增大，神经细胞的活力也逐渐升高，差异有统计学意义。其中0.025g/L与0.05g/L的TTLS对细胞活力改善尤为明显（P<0.01），二者之间比较，差异无统计学意义。由于药物浓度过大对细胞也有一定的损伤作用，因此本实验选用TTLS浓