高效液相色谱法测定青蒿不同部位山柰素含量

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1、高效液相色谱法测定青蒿不同部位山柰素含量【摘要】目的建立高效液相色谱法测定青蒿中山柰素的含量，并对青蒿不同部位的山柰素含量进行比较。方法岛津VPODS色谱柱（150mm×4.6mm，5μm），乙腈-0.2%磷酸溶液（35∶65）为流动相，测定波长367nm，柱温30℃，流速0.8ml/min，进样量20μl。结果山柰素在0.0218～0.436μg范围内呈现良好的线性关系（r=0.9999），平均回收率为98.70%，RSD为1.20%。结论该方法简便可行，重复性好，专属性强，可用于青蒿中山柰素的含量测定。测定结果表明，青蒿叶中山柰素

2、的含量最高，花次之，根较少，茎最低。【关键词】高效液相色谱法；青蒿；山柰素Abstract：ObjectiveToestablishHPLCmethodforthedeterminationofkaempferolinQinghaoandanalyzekaempferolcontentindifferentpartsofQinghao.MethodsKaempferolinQinghaoinedbyHPLCn(150mm×4.6mm,5μm).Themobilephase.Thecolumntemperatarel/min,andthe

3、samplingvolumepferolethodissimple，accurate，repeatableandsuitableforthedeterminationofkaempferolinQinghao.Theresultsshopferolisinleaf，flostheminimum.Keypferol青蒿为传统清热解暑要药，来源于菊科蒿属植物黄花蒿ArtemisiaannuaL.的干燥地上部分〔1〕，性味苦寒，归肝、胆、肾经，具清热、祛暑、除蒸、截疟等功效，临床上主要用于治疗阴虚发热、暑热外感、疟疾、湿热黄疸诸证。青蒿药用历

4、史悠久，全国各地均有分布。古代本草记载中除有青蒿地上部分供药用外，还有青蒿根的药用记录〔2〕；民间验方中亦有使用青蒿根治疗多种疾病的情况。因此，青蒿这味因青蒿素而备受人们关注的药迫切需要我们的深入研究，拓展其药用价值。青蒿的化学成分种类较多，主要含有挥发油、倍半萜内酯类、黄酮类、香豆素类等。目前，青蒿中的挥发油、青蒿素和香豆素类成分如东莨菪内酯等〔3〕均有其成分分析和含量测定的报道，但是，黄酮类成分的相关报道却未曾见过。山柰素为青蒿中黄酮类化合物之一，具有抗癌〔4〕、抗炎等药理活性，能反映青蒿的部分功效，因此，可作为一个指标成分进行分析

5、。本文首次建立了青蒿中山柰素的高效液相色谱（HPLC）含量测定方法，并对青蒿不同部位（叶、花、根、茎）的山柰素含量进行分析和比较，为青蒿药材和制剂的质量控制提供参考。1仪器与试药岛津（SPD-10A，LC-10AT）高效液相色谱仪；UV1100紫外－可见分光光度计。山柰素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）；乙腈、甲醇为色谱纯，水为纯净水，其余试剂均为分析纯。青蒿药材采自四川省安岳县青蒿基地，经笔者鉴定为菊科植物黄花蒿ArtemisiaannuaL.的干燥全株。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：岛津VP-ODS（150mm×4

6、.6mm，5μm）；流动相为乙腈－0.2%磷酸溶液（35:65）；测定波长367nm；流速0.8ml/min；柱温30℃；进样量：20μl。在该条件下，山柰素色谱峰与相邻色谱峰达到基线分离，分离度大于1.5，理论塔板数（N）按山柰素峰计算为4000以上。对照品和样品色谱图见图1。2.2线性范围的考察精密称取山柰素对照品适量，加甲醇制成每毫升含山柰素0.02mg的溶液，即得。将上述对照品溶液制成一系列不同浓度的对照品溶液，分别进样20μl，按上述色谱条件测定其峰面积。以山柰素进样量（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标，求得标准曲线的回归方

7、程为：Y＝5000000X－98335，R＝0.9999。结果表明，山柰素在0.0218～0.436μg范围内呈良好线性关系。2.3供试品溶液的制备取青蒿药材粉末1.0g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，置水浴锅中加热回流60min，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，过滤，取续滤液25ml，加5ml25%盐酸，水浴回流30min,迅速冷却至室温，移置50ml容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。2.4精密度实验精密吸取对照品溶液20μl，连续进样6次，依法测定，记录

8、峰面积，RSD为0.80%。2.5重复性实验取同批药材6份，精密称定，按“2.3”项下供试品溶液制备方法制备，依法测定，记录峰面积，计算山柰素的含量，平均含量为0.6751mg/g，RSD为1.14%。a-