皮肤病理石蜡切片课件

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1、（1）修材（9）烤片（2）固定（10）脱蜡（3）脱水（11）脱苯（水）→蒸馏水（4）透明（12）染色（5）浸蜡（13）脱水（6）包埋（14）透明（7）切片（15）封片（8）摊片比较：一般修材不超过1.5×1×0.2cm但在实际工作我们修材的大小一般要比中，平均修材在1.0×0.5口腔医院修的组织块小。大概×0.2cm左右有黄豆粒大小。原因：口腔医院包埋机提供的包埋框大小适宜，包埋时受组织大小的影响较小，而我们手工包埋大的组织较困难。注意：组织块的大小修材受实际病变程度的影响，不能墨守常规，一概而论。中性10％福尔马林1h比较：A

2、F液0.5－1h增加了AF液，相对比我们固定标本节约了约5个小时。功能：①保持原有组织形态，防止细菌腐蚀标本。②AF液是固定和脱水过程中的过渡阶段，缓冲组织的收缩。注意：口腔组织与皮肤组织的区别，不一定完全符合此种固定方法。议:AF液相当于90%乙醇进行脱水，时间较短，简略了梯度酒精脱水的完整性，是否造成组织收缩程度加大？95%乙醇1-1.5h比较：无水乙醇Ⅰ≧1.5h①我们95%乙醇采用两步脱水，3-4h无水乙醇Ⅱ≧1.5h以减小收缩力。②无水乙醇的脱水时间不超过2h，与此相比较，相差将近2倍。功能：脱去组织中的水分，以便石蜡

3、浸入。注意：①水和石蜡不相容，需脱水彻底，以便制备出好的切片。②无水乙醇同样具有使组织收缩变硬的影响，故不能时间过长。议：无水乙醇脱水3-4h皮肤组织会不会变硬？比较：二甲苯Ⅰ20min二甲苯Ⅱ20min透明时间都相同，但我们用的是松节油进行组织透明。功能:二甲苯是酒精和石蜡的共同溶剂（媒剂）目的是为石蜡的浸入作媒介。注意：二甲苯也能使组织变硬，故时间不宜过长。如果时间过长组织变硬，可以在香柏油中进行软化。议：松节油透明较慢，我们会不会透明不彻底？是否加长透明时间？比较：干燥箱温度65-70℃≧1.5h我们的干燥箱温度不稳，在7

4、2-84℃之间波动。功能：石蜡溶解二甲苯，已达到石蜡浸入整个组织的目的。注意：干燥箱中的温度过高或不稳，使组织变脆或烫伤，造成切片困难，不能制成理想的切片。议：石蜡的厂家（物理性能）不同，是否影响浸蜡的时间和切片？比较：包埋机进行！手工包埋，温度不宜掌握！注意：①手工包埋时蜡的温度不宜过高，最好做到组织的温度与蜡的温度相同。②蜡块上下两端应当修平，但留余蜡，否则切片弯曲不直，或无法连成带状，左右两端应不留余蜡，若余蜡过多时，是切片容易褶皱。切3μm厚度单次切片比较：4-5μm厚度，连续切片切片机：LEICA（莱卡)RM2255L

5、EICA（莱卡)RM2235单次切片的特点：组织片不易褶皱切片的时间较长粘片的组织较少比较：水浴温度37℃水浴温度不稳32-45℃极每个玻片黏贴两个组织片易造成组织片摊不开或张力过大而裂开。由于我们是连续切片，所以玻片上的组织片大于四个。比较：烤箱温度55℃≧1.5h我们烤箱温度不稳，在82℃左右烤≧1h。功能：是组织切片能够与玻片粘在一起，防止在染色过程中脱片。注意：烤片过程中温度不能过高，防止烫伤组织。比较：二甲苯Ⅰ≧12min时间都在20min左右，基本相同。二甲苯Ⅱ≧12min功能：二甲苯溶解切片中的石蜡，以便染色。注意

6、：二甲苯脱蜡的时间不能太短，已达到脱蜡彻底的目的，否则不易染色！（石蜡不与染液结合）无水乙醇2min反95%乙醇2min酒比较：精80%乙醇数秒梯我们没有反酒精梯度脱水，70%乙醇数秒度只用了95%乙醇进行脱苯1min。流水冲洗1-2min蒸馏水洗过功能：脱去组织上多余的苯，使组织梯度进水水，进而染色。注意：如果组织进入95%乙醇中有云雾状现象，说明二甲苯没有脱彻底或乙醇过陈旧、不纯。比较：苏木素5-10min基本相同。流水冲洗数分钟酸酒精（分化）数秒流水冲洗≧2min酸酒精具有脱色作用洗不彻底，染色较淡。1%氨水（反蓝）1mi

7、n流水冲洗充分氨水碱性，洗不彻底会影响伊红的亲和力。伊红10s-1min流水冲洗数分钟注意：染色时间的长短和组织的酸碱度和染液配制的时间有关，所以要以显微镜下观为准，不能一概而论。议：苏木素的不同是否影响组织染色的效果？70%乙醇数秒比较：80%乙醇数秒我们梯度酒精不健全，95%乙醇数秒在无水乙醇中2min。无水乙醇10min功能：脱去组织中的水分并对染片进行分化。注意：脱水过程中也是对伊红染色的分化，所以在梯度酒精中不宜过长。二甲苯Ⅰ2min比较：我们略去此步。二甲苯Ⅱ3min功能：提高组织片的折射率，增强组织片的质量。注意：

8、此步透明可以延长时间，提高组织片镜下的“新鲜”度。中性树胶中性树胶的处理：新买来看的树胶较粘稠，我们可以用二甲苯进行调和。注意：封片树胶不能过稀，封片时树胶要均匀充满盖玻片且树胶不及外溢为佳。要将组织全部覆盖，也不能有气泡。最后，粘贴标签。分子式：C16H14O