细菌形态学检查法(二)

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1、细菌形态学检查法（二）三、染色标本的检查细菌标本经染色后，不仅能清晰地看到细菌的形态、大小及排列方式，还可根据染色结果将细菌进行分类。染色标本与周围环境在颜色上形成鲜明对比，可在普通光学显微镜下进行观察。一般形态学检查均需染色。（一）常用染料用于细直染色的染料，大部分是人工合成的含苯环的有机化合物，在其苯环上带有色基和助色基。色基赋予化合物颜色，助色基可增加色基与被染物的亲和力。助色基有的为碱性（如一NH2），有的为酸性（如一0H），因此助色基的性质决定染料的酸碱性。常用染料一般均难溶于水，易溶于有机溶剂，实验室配制时通常制成盐类水溶液。1.碱性染料常用的碱性染料有碱

2、性亚甲蓝、结晶紫及碱性复红等，这些染料电离后色基带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。多数细菌等电点（P!）在2〜5之间，在屮性、碱性以及弱酸性环境屮都带负电荷，易被碱性染料着色，故细菌学检查中常用此类染料。2.酸性染料常用的有伊红、酸性复红及刚果红等，这些染料电离后色基带负电荷，不易与细菌结合，不常用于细菌染色。必要时可降低菌液的pH,使细菌带正电荷，方可着色。3.中性染料是碱性染料与酸性染料的复合物，如瑞氏染液中的伊红亚中蓝、吉姆萨染液屮的伊红天青等，可用于较特殊染色技术。（二）常用的细菌染色法根据所用染料是一种还是多种，细直染色法分为单染色法和复染色法。单染色法是

3、用一种染料染色，细菌涂片染成同一颜色，可观察到形态、大小及排列等特点,但不能显示细菌染色特性。复染色法是用两种或两种以上染料进行染色，将不同细菌或同一细菌的不同结构染成不同颜色。复染色法不仅可以观察组豊的形态结构，还可根据染色反应鉴别细直，故又称鉴别染色法。临床常用的主要有革兰染色和抗酸染色。革兰染色本法是细菌学检验屮最经典、最常用的染色方法，沿用至今已有百余年历史，是一种包拈初染、媒染、脱色和复染的鉴别染色技术。通过此染色法，可将细直分为革兰阳性（G+）菌和革兰阴性（G_）菌两大类，并可初步识别细直，缩小范围，有助于进一步鉴定。有时结台细菌特殊形态结构及排列方式，对

4、病原茵可做出初步鉴定。革兰染色的原理至今尚未完全清楚，有以下几种学说：①细胞壁学说：G+菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入，G一菌细胞壁结构较疏松，肽聚糖层少，脂质含量多，乙醇易渗入；②等电点学说：G+藍的等电点低（pi2〜3）,G"菌等电点较高（pl4〜5）,在相同pH条件下，G+菌所带负电荷比G一菌多，与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固且不易脱色；⑧化学学说：G4•菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐，可与结品紫和腆牢固地结合成大分子复合物，不易被乙醇脱色，GHS细胞内含极少量的核糖核酸镁盐，吸附染料量少，形成的复合物分子也较小，故易被乙醇脱色。目前认

5、为，细胞壁结构与化学组成上的差异是染色反应不同的丰要原因。革兰染色可用于菌落涂片和标本涂片。蓮墓涂片不仅可观察细菌的形态染色特点，更重要的是可以为后续选择合适的鉴定程序提供参考依据。另外，由于G+菌和菌型胞壁结构存在很大差异，对一些抗生素表现出不同的敏感性，且二者产生的致病物质及作用机制不同，因此革兰染色尚可为临床选择用药提供参考，帮助临床制定有针对性的治疗方案。在临床上除少数标本（如粪便、血液）外，绝大多数标木在分离培养前都要进行革兰染色。2.抗酸染色抗酸染色是细直着色后不被盐酸乙醇脱色的染色方法，其屮最具代表性的是萋-尼染色法。经此法染色可将迦菌分为抗酸性细菌和非

6、抗酸性细菌两大类。由于临床上绝大多数细菌为非抗酸性细菌，所以抗酸染色不作为临床上常规的细菌检查项目，只针对性用于结核病、麻风病等疾病的细菌检查。疑似结核分枝杆菌感染的标本，经抗酸染色后在油镜下观察，根据所见结果报告“找到（或未找到）抗酸菌”，可作出初步鉴定。另外，若改变脱色剂，诺卡菌属亦可呈弱抗酸性。A前认为，抗酸染色性的差异可能与菌体屮所含的分枝蓮壁、脂类等成分有关。3.荧光染色荧光染色是用能够发荧光的物质对标本进行染色，在荧光显微镜下观察发荧光的细菌。此法其有敏感性强、效率高、结果易于观察等特点，故在临床细菌鉴定中有很大的应用价值。目前主要用于结核分枝杆菌、麻风分

7、枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等病原菌的检测。如痰标木涂片、固定后用荧光染料金胺0法（也称金胺0-罗丹明B法）染色，在荧光显微镜下可观察到是金黄色荧光的菌体。4.负染色是一种使标本的背景着色而銦直不着色的染色方法。常用染液有墨汁，也可用酸性染料如刚果红、水溶性苯胺黑等，因酸性染料带负电荷，故菌体不着色，只能使背景着色。实际工作屮还可用墨汁负染色法配合单染色法（如吕氏亚甲蓝）检查细菌的荚膜，镜下可见黑色背景中蓝色菌体周围绕一层无色透明的荚膜。5.特殊染色迦菌的特殊结构如芽胞、鞭毛及荚膜等和其他结构如细胞壁、核质及胞质颗粒等，用普通染色法均小易着色，必