上皮性卵巢恶性肿瘤患者外周血t细胞亚群及nk细胞活性变化

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1、上皮性卵巢恶性肿瘤患者外周血T细胞亚群及NK细胞活性变化【关键词】卵巢癌T淋巴细胞亚群NK细胞【Abstract】ObjectiveTostudyontheexpressionandclinicalsignificanceofTlymphocytesubsetandNKcellactivityinthepatientsa.MethodsFloetryarksofTlymphocytesubsetsandNKcellsinbloodsamplesfrompatientsa.Dataobtainedfromthebenignepi

2、thelialovariantumorandthehealthpeopleplesfromcarcinomagroupthanthatfromthebenigntumorandthehealthcontrol(P<0.05).CD8+TlymphocytemunefunctionoflymphocytesinperipheralbloodofthepatientsaatingthefunctionofcellimmunebydetectingTlymphocytesubsetandNKcell.【KeyaTlymphoc

3、ytesubsetsNKcells卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，而死亡率居首位。卵巢癌早期不易发现，大部分恶性肿瘤患者就诊时已错过了治疗的最佳时间。因此，如何及时发现恶性肿瘤，争取早期治疗是提高疗效，延长生存期的关键因素之一[1]。而上皮性卵巢癌占卵巢恶性肿瘤的90％。本实验旨在通过检测上皮性卵巢癌患者外周血中T细胞亚群及NK细胞的改变，对其临床意义进行探讨。1材料与方法1.1研究对象2005年9月至2007年2月住院手术治疗的原发的上皮性卵巢癌肿瘤患者为检测对象，均经病理证实。其中恶性肿瘤34例，年龄20～

4、80岁，根据平均（48.03±11.43）岁。FIGO分期，其中Ⅰ期7例；Ⅱ期9例；Ⅲ期12例；Ⅳ期6例。良性肿瘤组30例：年龄18～75岁，平均年龄（45.23±11.32）岁，正常对照组30例，为本院健康体检者，年龄20～58岁，平均年龄（44.38±13.58）岁，所有受检对象均无免疫系统疾病或使用过免疫抑制剂。1.2试剂和仪器单克隆抗体抗CD3FITC、抗CD4PE、抗CD8PE及CD16+56PE，均由BectonDickinson公司生产，CD3+、CD4+、CD8+、CD16+56+分别代表总T、TH、TS、NK

5、细胞。红细胞裂解液由BD公司生产。FACSCan流式细胞仪为BectonDickinson公司产品。1.3检测方法取肝素抗凝的新鲜外周血100μl，加入上述单抗20μl，混匀，室温避光20min染色；加入1.5ml红细胞裂解液，混匀后室温避光放置10min，破坏红细胞；1500r/min离心5min，弃上清；每管加入2ml0.1%叠氮钠的磷酸盐缓冲液混匀，1000r/min离心5min，弃上清；加PBS1ml，混匀，2h内上机检测。采用FACSCan型流式细胞仪CellQuest软件获取与分析数据。以FSCH/SSCH设定淋巴

6、细胞门，IgG/FITC/IgG2aPE确定FL1和FL2的非特异性结合水平，同时调节FSC、SSC电压，FSC阈值，FL1-FL2%、FL2-FL1%荧光补偿。每管获取1万个细胞。1.4统计学处理数据以x-±s表示，用SPSS13.0统计软件进行统计学处理。2结果与良性肿瘤组及正常对照组相比较，卵巢癌患者CD3＋细胞、CD4＋细胞、CD4＋/CD8＋比值及NK细胞数量均显著降低(P<0.05)，而CD8＋细胞则显著升高（P<0.05），尤其是Ⅳ期患者差异更加显著（P<0.01）、Ⅰ期～Ⅳ期卵巢癌患者，CD3

7、＋细胞、CD4＋细胞、CD4＋/CD8＋细胞比值以及NK细胞数量逐渐下降，CD8＋细胞水平逐渐升高，其中Ⅰ、Ⅱ期卵巢癌患者之间以及Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌患者之间比较无显著差异（P>0.05），但Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌CD3＋细胞、CD4＋细胞、CD4＋/CD8＋细胞比值及NK细胞数较Ⅰ、Ⅱ期显著下降（P<0.05），而CD8＋细胞水平显著升高（P<0.05），见表1。表1卵巢癌患者及对照组外周血T细胞亚群及NK细胞数量(％，x-±s)本实验结果显示，卵巢癌组CD4、CD4/CD8比值明显低于良性及对照组，临床Ⅲ～Ⅳ期明显低于

8、Ⅰ～Ⅱ期，Ⅰ～Ⅱ期与对照组及良性组亦有明显差异。以上结果与文献报道结果一致[4]。这可能是由于肿瘤细胞分泌的多种免疫抑制因子所造成的。由于这种免疫抑制是肿瘤源性的，因此表现为患者的免疫状态与病情呈显著的负相关。研究表明[5]，NK细胞是在抗肿瘤早期发挥作用的效应细胞，无需预先