植物检疫学植物检疫性病毒病害课件

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1、第七章检疫性植物病毒2006.10.2检疫性植物病毒的检验方法番茄环斑病毒马铃薯帚顶病毒*其他检疫性植物病毒南方菜豆花叶病毒、可可枝肿病毒、香石竹环斑病毒了解检疫性植物病毒的种类、分布及重要性，掌握植物检疫性病毒的检验方法，掌握番茄环斑病毒、马铃薯帚顶病毒引起病害的症状、病原特性、寄主范围、病害的发生发展规律以及检验措施。检疫性植物病毒的检验方法生物学检测技术血清学检测技术电子显微镜技术分子生物学检测技术1.生物学检测技术原理：植物病毒对鉴别寄主或指示植物的特异反应。鉴别寄主谱：对一种病毒有特殊反应的一组寄主，一般包括3～5种不同反应类型的寄主植物。

2、一般包括：系统侵染的寄主局部侵染的寄主不受侵染的寄主例1，TMV和CMV在田间烟草植株上都呈花叶症，为了确定是否有TMV，或是将两者区分开，便可通过下列三种植物的接种来确定。2.血清学检测技术原理：抗原与抗体的特异结合方法：免疫电泳和免疫电镜、琼脂双扩散、ELISA等。两种抗原相同，都与已知的抗血清反应琼脂双扩散反应沉淀线判断图抗原1抗血清抗原2抗血清不专化含有两种以上的抗体抗原2抗原1抗原2抗原1抗血清抗血清两种抗原有一定的亲缘关系但不完全相同3.电子显微镜技术原理：以电磁波为光源，利用短波电子流，分辨率达到0.99Å，比光学镜要高1000倍以上主要

3、方法：超薄切片、负染技术、免疫电镜技术4.分子生物学检测方法分子杂交检测PCR技术检测分子杂交在DNA和RNA之间进行，依据是RNA与互补的DNA之间存在着碱基的互补关系。在一定的条件下，RNA--DNA形成异质双链的过程称为杂交。其中预先分离纯化或合成的已知核酸序列片段叫做杂交探针(probe)，由于大多数植物病毒的核酸是RNA，其探针为互补cDNA也称为cDNA探针。植物病毒分子探针具专一性强、灵敏度高、准确快速等优点分子探针的长度一般在500～1500核苷酸碱基对（bp）常用广谱分子探针，即包括多个不同专化性基因的核苷酸片断。PCR技术检测PCR

4、（Polymerasechainreaction）聚合酶联反应：将极微量的靶DNA片断，在4h左右特异性扩增上百万倍。植物病毒主要是RNA病毒，进行PCR检测时，需要将RNA逆转录成互补DNA（cDNA)，再进行PCR，即RT－PCR技术。检疫性植物病毒的检验方法番茄环斑病毒马铃薯帚顶病毒*其他检疫性植物病毒南方菜豆花叶病毒、可可枝肿病毒、香石竹环斑病毒了解检疫性植物病毒病害的种类、分布及重要性，掌握植物检疫性病原病毒的检验方法，掌握番茄环斑病、马铃薯帚顶病的症状、病原特性、寄主范围、病害的发生发展规律以及这两种病害的检验措施。番茄环斑病毒Tomato

5、ringspotvirus分布：1936年，美国东部新泽西发生ToRSV至今已有30多个国家和地区发现有该病毒，主要集中在北美温带地区，即美国和加拿大。寄主：ToRSV寄主范围广，包括双子叶和单子叶植物的35个科，自然界，ToRSV主要侵染木本植物，草本及观赏植物。危害情况：1975年，ToRSV侵染加拿大安大略的地区葡萄，产量损失76％～95％，甚至造成绝产。同年，ToRSV侵染后，纽约葡萄严重减产，奥尔良悬钩子果实减产21％～50％。症状：番茄症状（番茄环斑病）枝条卷曲和坏死，嫩叶、叶柄生褐色坏死环和波纹，果实受侵染，外表产生环斑，灰色到褐色栓皮葡

6、萄上的症状（葡萄黄脉病）叶黄脉、斑驳、环斑，节间缩短呈莲蓙状丛生，植株严重矮化，果实败育变小，至绝产，几年内植株渐渐坏死。植株剥皮后，可见增厚的海绵状韧皮组织及坏死凹陷苹果上的症状（appleunionnecrosisanddecline）砧木和接穗接合部肿胀，裂开，剥开树皮，树皮内侧变厚，多孔，愈合斑连接处有不明显的线，在这条线相对方向的形成层表面也有一类似的线，沿着这条线有一小的深沟或一条光滑的细缝，坏死的树皮覆盖在沟或缝上。叶变少，变小，黄化，嫩枝呈束状丛生，果实较小，果皮颜色加深。树皮颜色淡红桃树和李属其它树种上的症状（桃树黄芽花叶）：沿中脉产

7、生扁椭圆形羽缘状病斑，由灰绿色变为浅绿色，芽发育成为小而变形的丛生叶，成浅黄色而死亡。（桃树茎痘病）：树皮变厚，发软，海绵状，剥开树皮，树干上出现凹陷的痘斑和沟槽。叶片褪绿，叶芽发育推迟，落叶提前，果实畸形，果味变异，提前成熟和脱落。复盆子上的症状：侵染当季不表现症状，第二年叶片表现黄色斑驳，条纹或脉褪绿，叶片生长推迟，病株表现不结果或形成易碎果悬钩子上的症状：植株矮化，小果并减产，幼龄植株叶片出现褪绿环斑。第二年，叶片症状不明显，但新叶出现偏上性，早落。第三年有10％～80％的果枝死亡。病原：番茄环斑病毒学名Tomatoringsoptvirus（T

8、oRSV）异名烟草环斑病毒2号TomatoringspotvirusNo.2烟病毒13号Nic