草莓chs基因离析、克隆及病害诱导基因沉默(vigs)载体建设

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1、草莓CHS基因离析、克隆及病害诱导基因沉默(VIGS)载体建设第一章文献综述1草莓概述草莓(FragariaxananassaDuch.)属于蔷薇科草莓属，最早产于南美洲，如今世界上许多国家均有栽种。草莓的果实形状如同凤梨，所以又称凤梨草莓。草莓浆果芳香多汁，酸甜适口，并且含有多种营养物质，风味独特，深受男女老少所喜爱，被美誉为水果皇后[1]。1.1草莓果实的营养价值据《食品成分表》（中国医学院卫生研究所）的数据显示，在100g草莓鲜果中，营养物质的含量如下：水分90.7g，碳水化合物5.7g，粗纤维1.4g，蛋白质1.0g，无机盐0.6g，脂肪0.

2、6g，磷41.0mg，钙32.0mg，抗坏血酸50～120mg，铁1.1mg，尼克酸0.3mg，维生素B1和B2均为0.02mg，维生素A0.01mg。草莓果肉中可溶性糖以葡萄糖和果糖为主，约总糖的80%，蔗糖含量约占20%。草莓果肉的有机酸是以柠檬酸为主，约占90%，苹果酸含量较少，约为10%。果汁中含有丰富的氨基酸，主要有天冬酰胺、丙氨酸、谷氨酸和天冬氨酸。香味于一些挥发性物质，例如丁酸甲酯、丁酸乙酯、乙醛、乙酸甲酯等[2]。随着果实的成熟，香味物质含量逐渐增加，使得草莓果实的香味愈加浓郁。草莓果实不仅芳香多汁、营养丰富，而且具有较高的医疗效用和

3、保健价值。据李时珍的《本草纲目》记载，蛇莓具有消炎、止痛、清热、驱毒、通经、活络等功效和治疗蛇伤、烧伤、烫伤等作用。现代医疗表明，草莓对白血病、抗衰老、贫血病等方面都具有较好的功效，对体弱消瘦、营养不良、瘦肠胃不适等病症具有益处。草莓在抗菌、抗肿瘤、抗HIV病毒等方面具有一定的生物活性，主要是因为草莓果实中含有一种抗致癌物质鞣花酸（ellagicacid）[3-4]。正因如此，近年国际上各个国家都正在加紧对草莓抗致癌功能的开发利用。草莓还是一种天然的美容健身、益寿延年的保健良品，在国外具有廉价的保健品的美誉；因为草莓汁具有滋润肌肤、减少皱纹、抗衰的功

4、效，所以在日本，草莓被称为活的维生素。1.2草莓的经济意义草莓果实除了鲜食，还可以制作成各类加工产品，如草莓酱、草莓汁、草莓蜜饯、草莓汽水、草莓酒、冻干草莓、速冻草莓以及作为糕点的点缀物，饼干、糖果、雪糕等的添加剂等[6]。特别是草莓酱色、香、味俱全，属于高档果酱之一，在国际市场上非常受欢迎。草莓汽水、草莓汁芳香浓郁、味道纯美，深受人们的喜爱。速冻草莓、冻干草莓可化冻后鲜食，有利于草莓的长途运输。草莓以其他水果相比，具有种植后结果早，生长周期短、见效快等特点，素有早春第一果的美誉。采用露地、小拱棚、塑料大棚、日光温室等多种栽培形式，能够调控草莓上市的

5、时期，使得供应期延长到半年以上。草莓可以与幼龄果树如李、梨、桃、苹果、枇杷、葡萄等间作，这样做一方面可以以短养长以增加前期收入，另一方面由于草莓根系浅，不与果蔬争夺肥水，同时还有覆盖地面保持水分的作用[7-8]。2VIGS概述2.1VIGS的机理及途径VIGS是从研究转基因或寄主基因与病毒之间互相作用关系发展来的。它是将目的基因片段导入到病毒载体中，并用该病毒载体去侵染植物的组织细胞，此时组织细胞会自发识别入侵病毒的威胁，并且利用自身的防御机制来破坏病毒载体上所包含的外源基因，从而出现目标基因功能表达水平的下降甚至丧失，使得植株的表型发生突变，进而能

6、够在较短的时间内通过研究植株的表型分析该基因的功能特性[9]。在植物目前已知至少有3种自然存在的诱导RNA沉默的途径。第一条途径是细胞质siRNA沉默。主要在受病毒感染的细胞中起重要作用。第二条途径是对内源的miRNA的沉默。miRNA通过对RNA的剪切或蛋白翻译的抑制，负调控靶标基因的表达。第三条途径涉及到DNA甲基化和基因转录的抑制。属于染色质水平的调控。由PeterM就在研究拟南芥的CesA家族基因中，成功的利用了VIGS技术分析了CesA-1的基因功能[16]。第三章草莓CHS基因的克隆......................34-501

7、材料与试剂...................34-361.1试验材料...................341.2酶、试剂、菌种、培养基...................34-351.3主要仪器...................35-362实验方法...................36-433结果与分析...................43-474小结...................47-504.1草莓RNA的提取...................47-484.2关于PCR反应...................48

8、4.3关于草莓CHS基因...................48-50第四章VIGS载体构建.......