扁平苔藓皮损中mif-mmp

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1、扁平苔藓皮损中MIFMMP　　[摘要]目的：巨噬细胞移动抑制因子（MIF）与基质金属蛋白酶9（MMP-9）在扁平苔藓发病中的作用探讨。方法：采用免疫组化方法和RT-PCR法检测30例扁平苔藓组织和30例正常皮肤组织中MIF与MMP-9的表达情况。结果：MIF与MMP-9在扁平苔藓组织中的表达明显高于正常皮肤组织，差异有统计学意义（P<0.05）；MIF和MMP-9在扁平苔藓皮损中的表达呈正相关（r=0.636，P<0.01）。结论：MIF在扁平苔藓基底膜带损坏过程中可能有促进作用，其机制可能与上调MMP-9的表

2、达有关论文下载。　　[关键词]扁平苔藓；基底膜带；MIF；MMP-9　　[中图分类号]R781.5[文献标识码]A[]1673-7210（2010）11（c）-013-02　　　　TheexpressionandsignificanceofMIFandMMP-9inlichenplanus　　edicalUniversity,Taiyuan030001,China)　　[Abstract]Objective:ToinvestigatetheeffectonthepathogenesisofMIFandMMP-9inliche

3、nplanus.Methods:Immunchistochemicaltechniqueandreversetranscriptase-polymerasechainreaction(RT-PCR)alskin.Results:TheexpressionsofMIFandMMP-9arkedlyincreasedinlichenplanusthanthoseinthenormalskin(P<0.05);thereaycontributetothedamageofbasementmembranezosterinlich

4、enplanus,entmembranezoster;MIF;MMP-9　　　　扁平苔藓（lichenplanus）是一种病因不明的慢性或亚急性炎症性皮肤病，其组织学特征显示为上皮基底细胞的液化变性、基底膜带损伤。目前关于其基底膜带损伤机制的研究甚少。本文旨在检测扁平苔藓中MIF、MMP-9的表达，进一步探讨两者与扁平苔藓基底膜带损坏的关系。　　1材料与方法　　1.1材料　　病例组30例均系2008～2009年在我院皮肤科就诊，经临床和病理确诊的扁平苔藓患者。其中，男17例，女13例；年龄20～64岁，平均41.9岁。所有患

5、者在半年内均未使用过激素和免疫抑制剂治疗。于患者典型皮损处取材。对照组30例为同期在我院整形科、普外科所取的正常皮肤组织，其中，男20例，女10例；年龄18～60岁，平均37.6岁。两组患者年龄、性别差异无统计学意义，具有可比性。各标本取材后分两份，一份经中性福尔马林液固定，石蜡包埋后用于免疫组化染色；另一份予以液氮迅速冷冻后置于-80℃冰箱保存，用作RT-PCR实验。　　1.2试剂　　兔抗人MIF多克隆抗体为美国SantaCruz公司产品，兔抗人MMP-9多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司。二步法PV-6000免疫组

6、织化学检测试剂盒由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。MIF、MMP-9引物由上海生工生物工程技术有限公司合成。　　1.3方法　　1.3.1免疫组化法采用PV-6000二步法：备用标本进行4μm厚连续切片后脱蜡，3%H2O2去离子水阻断内源性过氧化物酶；滴加一抗（MIF浓缩液1∶150稀释，MMP-9浓缩液1∶100稀释），37℃孵育1h；滴加二抗PV-6000，37℃孵育20min；二氨基联苯胺（DAB）显色，苏木素复染、脱水、封片。　　1.3.2RT-PCR法采用Trizol一步法提取各标本总RNA，并用分光光度法检

7、测其浓度及纯度。加入逆转录反应体系合成cDNA，将其置于PCR反应体系，按RT-PCR试剂盒说明扩增GAPDH（作为内参照）、MIF、MMP-9。各基因引物如下，GAPDH上游引物：5′-TGAACGGGAAGCTCACTGG-3′，下游引物:5′-TCCACCACCCTGTTGCTGGA-3′，扩增片段307bp。MIF上游引物：5′-AGAACCGCTCCTACAGCAAG-3′，下游引物：5′-ATTTCTCCCCACCAGAAGGT-

8、3′，扩增片段234bp。MMP-9上游引物：5′-TTGACAGCGACAAGAAGTGG-3′，下游引物：5′-GCCATTCACGTCGTCCTTAT-3′，扩增片段179bp。PCR扩增条件：94℃预变性2min，94℃变