转移性骨肿瘤中cox2, vegf及微血管密度

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1、转移性骨肿瘤中COX2,VEGF及微血管密度【摘要】目的：探讨转移性骨肿瘤组织中环氧化酶2蛋白(COX2)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达及微血管密度值(MVD)三者的相关性，以明确对转移性骨肿瘤实施临床干预的可能性.方法：采用免疫组化SP法检测42例转移性骨肿瘤手术标本COX2,VEGF蛋白及CD34的表达，根据CD34染色结果应用OLYMPUSVANOX多功能显微镜，采用DMCⅡ型图像分析系统，测定计数MVD值，并同时取原发性恶性骨肿瘤、良性骨肿瘤标本作为对照，探讨COX2和VEGF在转移性骨肿瘤的表达情况，以及转移性骨肿瘤组织中MVD值.

2、结果：COX2及VEGF在转移性骨肿瘤组的阳性表达率分别为62％和81％，MVD在转移性骨肿瘤组和原发性骨肿瘤组中的阳性表达率均高于良性骨肿瘤组，差异有统计学意义；转移性骨肿瘤组中表达率虽高于原发性骨肿瘤组，但差异没有统计学意义.提示MVD与骨肿瘤的发生与转移有密切的相关性.结论：COX2,VEGF在骨肿瘤转移、发展过程中可能起重要作用；MVD可作为判断肿瘤恶性程度的客观指标.【关键词】环氧化酶2蛋白　　0引言　　恶性骨肿瘤血管生成是肿瘤生长和转移的形态学基础，肿瘤血管为肿瘤快速生长提供充足营养，且新生血管壁薄弱容易被肿瘤细胞侵入［1］，成为肿瘤转移的通道

3、.环氧化酶2蛋白（cyclooxyenase2，COX2）和血管内皮生长因子（vascularcellgroicrovesseldensity，MVD）的内在联系.　　1对象和方法　　1.1对象收集兰州大学第一医院200208/200512原发灶明确且资料完整的转移性骨肿瘤手术切除标本共42(男29，女13)例，平均年龄60.2(36～82)岁.并同时取良性骨肿瘤10例、原发性恶性骨肿瘤标本13例作为对照.所有患者的标本病理诊断均经复检确诊.即用型COX2及VEGF鼠抗人mAb,CD34mAb均购自福建迈新公司.OlympusVANOX多功能显微镜

4、及DMCⅡ型图像分析系统和ImageProplusv.4.5软件由河南省洛阳正骨医院病理室提供.其它病理仪器和试剂由甘肃省人民医院病理科提供.　　1.2方法　　1.2.1标本制备腊块连续切片，厚4μm，一个腊块捞片5～6个，分别为HE染色复检、COX2标记、VEGF标记、CD34标记及阴性对照片或备用.采用免疫组化SP法检测标本COX2,VEGF蛋白及CD34的表达.阴性对照片采用同批PBS为一抗的空白对照片.切片采用OlympusVANOX多功能显微镜及DMCⅡ型图像分析系统和ImageProplusv.4.5软件进行分析；定性分析COX2,VEG

5、F,CD34染色程度及阳性细胞百分比，定量分析肿瘤组织CD34标记的微血管密度.　　1.2.2VEGF阳性结果判定用已知人低分化胃溃疡侵润性腺癌组织VEGF阳性片为阳性对照（福建迈新编号：MAB0243），阴性对照片采用同批PBS为一抗的空白对照片.骨肿瘤组织VEGF阳性表达主要在细胞胞质内和细胞膜上，染色由浅黄至棕褐色.选择高倍镜视野（×400）视野，判定方法参考Mattern法［2］，按染色深浅分为4级：未见染色为0分（-），染成浅黄即轻度染色为1分（＋），染成棕黄即中度染色为2分（），染成棕褐色即重度染色为3分（）；阳性细胞百分比：未见染色为0分（-

6、），染色细胞<25%为1分（＋），染色细胞>25%且<50％为2分（），染色细胞>50%为3分（）；两者积分0～2分判定为阴性，>2分为阳性.　　1.2.3COX2阳性结果判定用已知人肺腺癌COX2阳性片为阳性对照（福建迈新编号：RMA0549）.骨肿瘤组织COX2阳性表达主要在细胞胞质靠近细胞核膜的部位，染色由浅黄至棕褐色.选择高倍镜（×400）视野，判定方法：COX2免疫组化染色以细胞质内出现棕黄色颗粒者为阳性染色.结果评分参照SosloVD分析采用已知人结肠癌内皮细胞CD34阳性片为阳性对照（福建迈新编号：003

7、4），CD34阳性表达主要在血管内皮细胞.MVD的测定方法：参照VD.每个与邻近微血管明显分离的阳性染色的血管内皮细胞或血管内皮细胞簇都视为独立的微血管；只要结构不相连，其分支结构也计作一个血管计数.而直径大于8个红细胞的血管，有厚的平滑肌的血管及硬化区的血管不在计数范围内.　　　　统计学处理：采用SPSS10.0统计软件进行统计学数据分析，按资料类型分别采用χ2检验和方差分析，P<0.05为差异有统计学意义.　　2结果　　2．1镜检原发性骨肿瘤的组织结构多紊乱，与良性骨肿瘤相差较大，血管组织多而密集，排列紊乱，成灶状，甚至满视野均是血管.转移性恶性骨肿瘤

8、表现尤为突出（图1）.