tnf-α对滋养细胞visfatin表达的调控及机制研究

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1、授予单位代码10089学号或申请号20152024中国图书分类号R714.7HebeiMedicaluniversity硕士学位论文学术学位TNF-α对滋养细胞visfatin表达的调控及机制研究研究生：张艳红导师：霍琰教授专业：妇产科学二级学院：河北省人民医院2018年3月目录中文摘要…………………………………………………………………1英文摘要…………………………………………………………………3英文缩写………………………………………………………………6研究论文TNF-α对滋养细胞visfatin表达的

2、调控及机制研究前言………………………………………………………………………7材料与方法………………………………………………………8结果………………………………………………………………19附图………………………………………………………………21附表………………………………………………………………30讨论………………………………………………………………31结论………………………………………………………………35参考文献…………………………………………………………35综述内脂素与妊娠期代谢综合征……………………

3、……………41致谢……………………………………………………………………50个人简历………………………………………………………………51中文摘要TNF-α对滋养细胞visfatin表达的调控及机制研究摘要内脂素(visfatin)是一种主要由胎盘和内脏脂肪组织表达和分泌的脂肪细胞因子，可参与炎症反应的调节，并具有胰岛素模拟活性，参与糖脂代谢。近年发现内脂素还与胰岛素抵抗(IR)相关，参与妊娠期糖尿病(GDM)的发生发展。过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR-γ)是一种细胞核受体，主要表达于脂肪组织，可经噻唑

4、烷二酮类药物激活，调节糖脂代谢，还可抑制炎症因子的表达，发挥抗炎作用。c-Jun氨基末端激酶(JNK)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，能够被多种细胞因子和应激激活，被认为是联系炎症和胰岛素抵抗的重要信号转导分子。GDM患者TNF-α等炎症因子水平升高，对滋养细胞visfatin的表达具有调节作用，而PPAR-γ和/或JNK信号通路是否参与TNF-α对滋养细胞visfatin表达的调节，尚未见研究和报道。目的：通过BeWo细胞的体外培养，探讨TNF-α对BeWo细胞visfatin表达的影响及调控机制。方法：

5、用不同浓度的TNF-α(0,1,10,100ng/mL)作用于BeWo细胞48h，FQRT-PCR检测细胞visfatin、PPAR-γmRNA的转录水平，选出有效作用浓度；以该浓度的TNF-α作用于BeWo细胞12、24、48、72h，FQRT-PCR检测visfatin、PPAR-γmRNA转录水平，选出有效作用时间；以有效浓度和时间干预BeWo细胞后，Western-blot检测细胞中visfatin、PPAR-γ、JNK及p-JNK蛋白的表达水平，后加入JNK抑制剂SP600125，Wester

6、n-blot检测visfatin、JNK及p-JNK蛋白水平，ELISA检测细胞外visfatin的分泌水平。结果：1.不同浓度的TNF-α(1,10,100ng/mL)均使visfatin及PPAR-γmRNA表达降低，呈浓度依赖性；相关性分析表明：visfatin与PPAR-γmRNA表达正相关(r=0.794，P<0.01)。2.TNF-α(100ng/ml)作用BeWo细胞12、24、48、72h，PPAR-γmRNA表达仅在48h降低；visfatinmRNA表达于12、24h无明显变化，48

7、、72h表达降低(P<0.01)，48h降低最明显；visfatin与PPAR-γmRNA表达正相关(r=0.749，P<0.01)。1中文摘要3.TNF-α(100ng/ml)作用BeWo细胞48h后，PPAR-γ及JNK蛋白表达无明显变化，visfatin蛋白表达降低(P<0.01)，同时JNK磷酸化水平增加(P<0.05)，visfatin与p-JNK蛋白水平呈负相关关系(r=-0.816，P=0.048)；加入JNK抑制剂SP600125后，与未用抑制剂组比较，JNK磷酸化水平降低，visfat

8、in蛋白水平增加(均P<0.01)。4.对照组、TNF-α组和TNF-α+SP600125组分别处理细胞48h后，TNF-α组与对照组相比，visfatin的分泌水平略有降低(0.110±0.066vs.0.169±0.092ng/ml，P=0.38)，TNF-α+SP600125组与TNF-α组比较，visfatin分泌略有升高(0.235±0.067vs.0.110±0.066ng/ml，P=0.09)。结论：1.TNF-α可通过激活J