杜仲叶中绿原酸的提取研究

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1、杜仲叶中绿原酸的提取研究刘军海，任惠兰，裘爱泳【摘要】　　目的研究以丙酮为溶剂提取杜仲叶绿原酸的最佳工艺条件。方法通过单因素实验研究各因素对提取率的影响，应用正交实验优化工艺条件。结果丙酮提取杜仲叶绿原酸最佳工艺条件为：丙酮浓度40%，提取温度65℃，料液比1∶13，提取时间2h，提取两次。结论在最佳条件下，绿原酸提取率和得率分别为2.25%，17.15%，纯度达到13.12%。【关键词】绿原酸；提取；杜仲叶；丙酮　　Abstract：ObjectiveTheextractiontechnologyofchlorogenicacidfromEumiaulmoid

2、esleaftheleavesofEumiaulmoidesents,andthentheoptimizedconditionsfortheextractionofchlorogenicacidizedconditionsperature65℃;materialtosolvent1:13,extractiontime3h,andextractiontizedconditions.　　KeylaUlmoides；Acetone绿原酸是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物〔1〕。绿原酸是一种具有广泛生理活性和药理活性的物质，具有利胆、抗菌、降压

3、、增加白血球及兴奋中枢神经系统、抗肿瘤、降脂、清除自由基等多种药理作用，对消化系统、血液系统和生殖系统疾病均有显著疗效〔1～6〕。因此，绿原酸在医药制剂上应用越来越广泛，是目前国际公认的“植物黄金”。绿原酸主要存在于杜仲、金银花、葵花籽粕、元宝枫等植物中〔7，8〕。近几年研究发现，杜仲叶Eumiaulmoidesleaves中含有较高的绿原酸，其叶中含量为1%～5.5%〔9，10〕。杜仲是我国的特殊经济林，在我国栽培面积相当广泛，全国约有杜仲林28万ha，每年可产叶400万吨〔11〕，而杜仲叶的利用率仅占可采集叶的10%～20%。因此利用杜仲叶生产绿原酸具有巨大

4、的社会效益和经济意义。　　在中草药有效成分提取过程中，常用乙醇为溶剂。我们在提取杜仲叶绿原酸研究中发现，乙醇提取虽然得率相对较高，但在提取过程中醇溶性蛋白质、黏液、树脂、鞣质、色素、油脂等杂质析出量大，过滤较困难，尤其是当溶剂中含水量高时更加明显，同时给以后的分离纯化工序造成很大困难。因此有必要寻找更好的提取剂提取。绿原酸属酚酸类化合物〔12〕，也属植物多酚类物质〔13〕。有资料报道〔14〕，丙酮和丙酮-水体系对植物多酚具有很强的溶解性，而且用丙酮提取杜仲叶中主要活性成分的工艺未见文献报道。本实验采用丙酮-水体系对杜仲叶中绿原酸提取工艺进行研究。　　1器材与方法

5、　　1.1材料与仪器杜仲叶，购于北京某地区，为初秋采集叶。绿原酸标准品（中国药品和生物制品鉴定所）；丙酮、正丁醇、冰乙酸均为分析纯（上海试剂公司）；实验用水为去离子水。Unic-2100型紫外可见光分光光度计（上海龙尼柯仪器有限公司）；RE-52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；365nm紫外分析仪（上海科艺光学仪器厂）；SHZ-III循环水多用真空泵（上海亚荣生化仪器厂）。　　1.2方法　　1.2.1杜仲叶中绿原酸含量的测定采用纸层析-紫外分光光度法〔15〕。　　1.2.2提取单因素实验随机称取5g干燥的杜仲叶粉（20目），置于250ml平底烧瓶中，采用

6、不同的实验方法设计进行提取。改变提取条件以确定提取因素变化范围以及各因素的较佳值。每次提取液过滤，真空蒸发去除丙酮后，用去离子水定容至100ml，测定绿原酸的含量，并折算为每100g干叶中的提取得率。　　1.2.3正交实验设计在提取单因素实验的基础上，采用正交实验优化工艺条件。以丙酮浓度、浸提温度、浸提时间、料液比4个因素作为考察对象，每个因素选用3个水平。选用L9（34）表，并安排实验，优化工艺条件。　　2结果　　2.1丙酮浓度对提取率的影响　　在提取温度35℃，料液比1∶12，提取时间2h，丙酮浓度对绿原酸提取率的影响见图1。由图1可以看出，当浓度低于40%

7、时，随着丙酮浓度的增加，绿原酸的提取率升高，用40%丙酮的提取，其提取率最高。随后，绿原酸的提取率随丙酮的浓度的升高而降低。　　2.2温度对提取率的影响　　不同提取温度对绿原酸提取率的影响见图2。从图2可以看出，随着提取温度的升高，其提取率增加，当温度高于55℃时，不再增加。这是由于温度升高，分子运动加快，有利于分子的扩散，有利于活性物质的溶出；当温度过高时，丙酮气化，不利于活性成分的析出，而且温度过高，杂质溶出量也相应增大，活性成分易分解破坏。　　2.3料液比对提取率的影响　　不同料液比对绿原酸提取率的影响见图3。随着溶剂量的增加，浸提效果也随之增高，但提高幅

8、度减小。当料液比超1∶1