大鼠急性脊髓损伤后血小板衍化生长因子

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1、大鼠急性脊髓损伤后血小板衍化生长因子【摘要】目的：探讨血小板衍化生长因子_B(PDGF_B)在脊髓损伤(SCI)后对脊髓功能恢复的作用。方法：健康雌性SD大鼠48只随机分为免疫组化组(30只)和反转录_聚合酶链反应(RT_PCR)组(18只)。麻醉后，用改制的Ⅱ型纽约大学装置建立大鼠脊髓急性损伤模型。用免疫组化检测急性SCI后不同时段PDGF_B在脊髓中的表达，用RT_PCR检测PDGF_B的mRNA在急性SCI后不同时段表达的变化。结果：①PDGF_B蛋白表达：急性SCI后24h，PDGF_B在损伤区周围神经元的表达开始增

2、加(592±323)，并于7d后维持在一定水平，14d后PDGF_B阳性细胞数增多，28d达高峰(8500±1349)，主要表达于坏死区增生的神经胶质细胞。②PDGF_BmRNA表达：SCI后1d，PDGF_BmRNA表达降低，3d接近正常，随后略有下降，14d后mRNA表达升高，28d基本回到正常。结论：急性SCI后，PDGF_B对损伤脊髓的功能恢复有重要作用。【关键词】血小板衍化生长因子脊髓损伤神经营养因子　　［Abstract］Objective:Toexploretheroleofplateletderive

3、dgroaleratslyassignedintoimmunohistochemistrygroup(n=30),RT_PCRgroup(n=18).Afteranesthesia,theratmodelodifiedNemunohistochemistrymethodonitorthechangesofPDGF_BmRNA.Results：AfterSCI,theexpressionofPDGF_Bthatofcontrolgroup.Onedaylater,thenumbersofPDGF_Bpositivecellsa

4、ndthePDGF_BmRNAbersofPDGF_BpositivecellsreachedthepeakbecauseofproliferativegligcyteConclusion:AfterSCI,PDGF_BplaysanimportantroleinspinalcordfunctionalrecoveryafterSCI.［Keyg/kg)的戊巴比妥钠。术区备皮，体积分数75%的酒精消毒，铺巾。做背部正中切口(T9～T11)，钝性分离皮下组织、肌肉，暴露T10棘突。用咬骨钳仔细咬去T10棘突及椎板，充分暴露该

5、段脊髓背面及两侧［1］。用改制的Ⅱ型NYU装置(撞击高度25mm，撞击针10g，接触面积2mm2)对暴露脊髓的T10节段进行撞击,造成相当于中度SCI程度。撞击成功的标志：大鼠尾巴痉挛性摆动，双下肢及躯体回缩样扑动，双下肢呈驰缓性瘫痪。术区撒青霉素粉，用周围组织填充椎骨缺损部位，分层缝合。术后皮下注射青霉素10000u，开台灯保暖［2］。术后1、3、7、14、28d及对照组按05mL/100g体质量腹腔注射01%戊巴比妥钠，深度麻醉。开胸暴露心脏，行左心室_主动脉插管，剪开右心耳，灌注NS200mL，然后灌注预冷的体积分

6、数3%的福尔马林200mL，至动物肢体僵硬。固定2h后，以撞击点为中心，取出损伤部位(节段T9～T10)及其近、远端各2个节段的脊髓，测量其左、右横径和前、后径后用体积分数10％的福尔马林继续固定24h，重新修整后石蜡包埋切片(约5μm)，每隔20张切取1张。13方法131动物行为评分分别于SCI后3、7、14、21、28d对两组进行BBB(Basso,Beattie,Bresnahanlootorratingscale)评分，检测其术后运动功能的恢复情况［1］。132免疫组化采用链霉素生物素蛋白_过氧化物酶连接法

7、：切片以二甲苯脱蜡10min×2次，梯度酒精(100％、90％、85％、75％)各洗1min，001mol/LPBS振动漂洗5min，微波抗原修复，入体积分数3％的H2O2中处理15min以阻断内源性过氧化物酶，蒸馏水振动漂洗3min×3次；然后用正常山羊血清工作液封闭10min；入兔抗大鼠PDGF_B多克隆抗体(1∶100，武汉博士德公司，中国)4℃冰箱过夜；生物素化标记山羊抗兔IgG37℃孵育15min；卵白素标记的辣根过氧化物酶复合物37℃孵育15min；各步抗体反应间均用001％mol/LPBS漂洗3min×3次

8、。新鲜配制的含003％H2O2的005％DAB显色液显色10min，以001％mol/LPBS终止反应；苏木精对比染色，体积分数1％的盐酸酒精分化数秒，碳酸锂反蓝；梯度酒精脱水，二甲苯透明后中性树脂封固。阴性对照用001％/LPBS代替一抗，采用上述同样操作，结果为阴性。在Ni_k