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时间:2018-11-11
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1、白芷香豆素的镇痛作用部位及其机制作者:王海莉王春梅李贺崔新颖【摘要】目的观察白芷香豆素(CoumarinofAngelicaeDahuricae,CAD)的镇痛作用部位及其机制。方法利用小鼠福尔马林实验及侧脑室注射CAD对小鼠热板痛反应潜伏期的影响以分析CAD的镇痛作用部位;观察CAD对甲醛所致伤害性疼痛模型小鼠血清一氧化氮(NO)和脑组织中β内啡肽(βEP)含量的影响。结果CAD(30,60,120mg/kg)不同程度地抑制了小鼠福尔马林实验第一和第二时相反应。侧脑室注射CAD(6mg/kg)明显延长小鼠热板痛反应潜伏期。CAD(30,60,120mg/kg)连续给药4d,使甲醛所
2、致伤害性疼痛模型小鼠血清NO含量和脑中βEP含量明显下降。结论CAD对物理、化学等伤害性刺激具有明显镇痛作用,作用部位可能既在中枢也在外周,镇痛机制可能与抑制NO的合成或释放有关。【关键词】白芷香草醛;镇痛作用;一氧化氮;β内啡肽 【Abstract】ObjectiveToobserveanalgesicsiteandmechanismsunderlyingofCoumarinsofAngdicaeDahuricae(CAD).MethodsTheantinociceptivesiteofCADiceformalintestandmicehotplatetestafterintr
3、acerebroventricular(icv)administration;theconcentrationofnitricoxide(NO)inserumandβEPinbrainofmiceeasuredethodandradioimmunoassay(RIA)respectively.ResultsCAD(30,60,120mg/kg)reducedthefirstandsecondphaseresponsesofmiceformalintestparedeicvadministrationofCAD(6mg/kg)formice,hotplatelatencyandβE
4、Pinbrainofmiceinducedbyformalinayberelatedtocentralandperipheralmechanisms. 【Keya公司产品;NO试剂盒,由南京建成生物工程研究所提供,批号:20061221;β内啡肽放射免疫测定盒,由北京海科锐生物技术中心提供,批号:070115。 1.2福尔马林致痛法〔5〕小鼠60只,雌雄各半,随机分为6组,分别为对照组、吗啡组、阿司匹林组、CAD低、中、高剂量组。吗啡组和阿司匹林组腹腔注射(ip)给药后0.5h,其余各组ip给药后2h,每鼠右后足跖皮下注射0.25%福尔马林10μl。分别记录注射后0~5min(第一
5、时相)和15~30min(第二时相)小鼠舔或抖被注射足的累计时间,以秒(s)为计算单位。 1.3小鼠侧脑室注射法〔6〕小鼠40只,随机分为4组,分别为对照组、吗啡组、CAD组、CAD同容积腹腔注射组。固定小鼠后,使用10μl微量注射器,针头外连细长硬塑料管,硬塑料管接4号针头,使针尖部露出约2.5mm的进针长度,于两耳前缘线与矢状线交点处的前、外各2mm处进针注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液,注射容积10μl,时间5s,留针10s,处死小鼠,解剖观察伊文思蓝是否进入脑室,以确定注射部位。按上述方法进行小鼠侧脑室给药,然后以热板法分别测定给药后5、15、30、45、60min小鼠痛阈,观
6、察镇痛效应。 1.4CAD对甲醛所致伤害性疼痛模型小鼠血清NO含量和脑βEP含量的影响小鼠50只,雌雄各半,随机分5组,分别为阴性对照组、吗啡组、CAD低、中、高剂量组,每天分别腹腔注射,连续4d(吗啡组除外),末次给药后(1.5h后阳性组腹腔注射吗啡10mg/kg)2h,每只鼠右后足跖皮下注射0.25%甲醛溶液20μl,2h后处理〔7〕。将小鼠快速断头取血,分离血清,-20℃冰箱保存待测。小鼠头部立即于冰台上分离全脑,投入沸生理盐水中煮4min,取出滤纸吸干、称重,制备10%脑组织匀浆,取上清液贮存于-20℃保存。采用硝酸还原酶法和放射免疫学方法分别测定血清中NO含量和脑组织中β
7、EP的含量,具体步骤说明书。 1.5统计学方法数据以x±s表示,采用SPSS10.1软件进行两组间t检验和多组间方差分析。 2结果 2.1CAD对小鼠福尔马林实验的影响小鼠一次性腹腔注射给药CAD30,60,120mg/kg,与对照组比较,CAD中、高剂量组使福尔马林实验第一时相内舔或抖注射足累计时间明显减少(P<0.01),3个剂量组均使第二时相内舔或抖注射足累计时间明显减少(P<0.05或P<0.01)。
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